塑料制品方便人們生活的同時，也造成了短時期難以降解的“白色污染“。研究人員欲比較大腸桿菌YT1和芽孢桿菌YP1兩類細菌降解塑料（主要成分為聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等，兩類細菌主要降解PE）的能力，并通過基因工程拼接黃粉蟲腸道內菌株WZ的降解PVC的胞外酶基因A，培育降解塑料的“超級菌”。
（1）菌株的篩選。配制固體培養基，接種菌株后表層覆蓋0.1mm厚度的PE塑料。分組實驗結果如圖所示：
| 培養基及接種菌株 | 培養基1 | 培養基2 | 培養基3 |
| 單獨培養并接種YT1 | 單獨培養并接種YP1 | 混合培養YT1和YP1后，選取YP1接種 | |
| 降解圈（直徑D/mm） | 3.5 | 1.8 | 4.2 |
PE塑料
PE塑料
為唯一碳源的培養基，從功能上講，該培養基屬于 選擇培養基
選擇培養基
。②篩選分解PE塑料能力強的菌株不能直接以降解圈的大小為指標，其原因是
因為菌體繁殖力不同，形成的菌落大小不同
因為菌體繁殖力不同，形成的菌落大小不同
。培養基3中接種混合培養后的YP1，其降解圈直徑明顯加大，其原因可能是 YP1和YT1混合培養過程中，YP1菌株整合了YT1的對PE塑料高分解力的基因，發生了轉化
YP1和YT1混合培養過程中，YP1菌株整合了YT1的對PE塑料高分解力的基因，發生了轉化
。（2）培育“超級菌”。對菌株WZ的A基因測序可知，如果在其調節功能區增加一個堿基對A/T，則可以大大增強其基因表達能力。通過經典的大引物PCR定點誘變技術在體外改造A基因，操作過程如圖1。然后與圖2所示的質粒構建表達載體，培育“超級菌“。
①利用大引物PCR進行定點誘變需要進行兩輪PCR（PCR和PCRa），在PCR，中獲得的大引物是指
以誘變引物延伸得到的DNA鏈為模板，引物1與之結合延伸得到的DNA子鏈
以誘變引物延伸得到的DNA鏈為模板，引物1與之結合延伸得到的DNA子鏈
，至少需要 4
4
個PCR循環才能獲得完整的改良A基因。②構建改良基因表達載體時，為實現質粒和改良基因的準確連接，應選用的限制酶是
XmaⅠ和BglⅡ
XmaⅠ和BglⅡ
。表達載體導入受體菌株時，有的質粒含有改良的A基因，有的質粒為空白質粒。在含氨芐青霉素和β-半乳糖苷的平板上培養一段時間后，其中白色菌落含有重組質粒，判斷的依據是 含有改良基因A的重組質粒不含有完整的LacZ基因，受體菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培養基變藍的酶
含有改良基因A的重組質粒不含有完整的LacZ基因，受體菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培養基變藍的酶
。【答案】PE塑料；選擇培養基；因為菌體繁殖力不同，形成的菌落大小不同；YP1和YT1混合培養過程中，YP1菌株整合了YT1的對PE塑料高分解力的基因，發生了轉化；以誘變引物延伸得到的DNA鏈為模板，引物1與之結合延伸得到的DNA子鏈；4；XmaⅠ和BglⅡ；含有改良基因A的重組質粒不含有完整的LacZ基因，受體菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培養基變藍的酶
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：25引用：1難度：0.5
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1．回答下列關于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細胞核直徑約1μm,初步推測為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結構有（多選）．
A．細胞膜 B．核糖體 C．擬核 D．莢膜
（2）表中培養液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進行測定，則應選用表中的培養液，針對不選用的其他培養液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長
②具有，會影響對SM01自身產生的酶活力的測定結果
③缺乏，會影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進行測定．
表 試驗用培養液配方培養液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
2．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應用的除草劑，能抑制土壤細菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細菌菌株，并對其計數（如圖所示），以期為修復污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（ ）
發布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環保領域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細菌，并了解其生長規律，進行了如下操作．請回答下列問題：
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（2）馴化脫硫細菌：將篩選出的脫硫細菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養基上，待長出菌落后再重復上述步驟，并逐步延長通SO2的時間，同時逐步降低培養基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細菌．
（3）培養與觀察：一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度及培養時間），馴化后的脫硫細菌表現出穩定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細菌的核糖體．
（4）探究生長規律：在計數時，計數方法有稀釋涂布平板法和直接計數法．在用稀釋涂布平板法進行計數時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌，通常推測統計的菌落數往往比活菌的實際數目．發布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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