大腸桿菌是發酵工程常用的微生物。雜菌污染是導致大腸桿菌發酵失敗的重要原因。為解決該問題，科學家利用基因工程技術，改造出一種加強型大腸桿菌。

（1）發酵過程中雜菌會與大腸桿菌

競爭

競爭

培養液中的營養物質，導致大腸桿菌發酵效率降低。
（2）①甲酰胺和亞磷酸鹽是特殊的氮源和磷源，其被微生物分解利用的過程如下圖所示。大腸桿菌和雜菌都不能同時利用這兩種物質，原因是

大腸桿菌和雜菌都不含有F酶和P酶

大腸桿菌和雜菌都不含有F酶和P酶

，無法合成NH₄⁺和磷酸鹽。
②已知α菌能合成F酶，但不能合成P酶。為獲得能合成P酶的微生物，研究人員進行如圖1篩選，正確的是

AD

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。
A．圖中所用培養液（基）應以亞磷酸鹽為唯一磷源
B．圖中B處接種方法是平板劃線法
C．從菜園、植物園等地獲取的樣品需要進行滅菌
D．圖1中C中長出的細菌能夠合成P酶
③細菌的核糖體RNA（rRNA）序列可作為菌種鑒定的依據。經過鑒定、篩選出細菌β。
（3）科研人員分別從α和β菌中獲得F酶和P酶基因，使二者在大腸桿菌中同時表達，表達方式有兩種。
①融合表達：將F、P基因間用片段linker連接成1個融合基因，與質粒A重組。該基因能表達出一個融合蛋白，同時具有F酶和P酶的特性。
②共表達：將F、P基因與質粒B重組，兩者可各自表達，互不干擾。科學家將重組質粒A和B分別轉入大腸桿菌獲得菌A和菌B，在甲酰胺、亞磷酸鹽為唯一氮源、磷源的培養基中培養，檢測其中細菌濃度的變化，獲取最優加強型大腸桿菌，結果如圖2。可知質粒

A

A

（A/B）的表達效果更好。請在下圖質粒上標出可能的基因序列

。
（4）圖1所用的接種方法可用來對活菌進行計數，統計的數目往往比活菌的實際數目偏低，這是因為

當兩個或多個細胞連在一起時，觀察計數只能計為一個菌落

當兩個或多個細胞連在一起時，觀察計數只能計為一個菌落

。此外，測定微生物數目的另一種方法是

顯微鏡直接計數法

顯微鏡直接計數法

。