當前新冠病毒的主要檢測手段有核酸檢測法和免疫學檢測法。請回答下列問題:
(1)核酸檢測方法:目前,新冠病毒的實驗室檢測主要依賴核酸檢測,包括以下兩種方法:
①全基因組測序:病原體宏基因組測序(mNGS)是目前臨床實踐中最常用的病原體基因測序方法。mNGS技術首先需要將病毒RNA制備成測序儀可以識別和分析的DNA文庫,需要將RNA 反轉錄反轉錄產生的多種互補DNA片段,與 載體載體連接后儲存在 受體菌受體菌中。然后使用測序儀對核酸序列進行檢測。檢測結果經生物信息學軟件處理,最終展現出與病毒序列相關的信息。
②熒光PCR法:在常規PCR檢測的基礎上加入了熒光物質,通過監測發光信號來進行分析的一種方法。PCR利用 DNA(雙鏈)復制DNA(雙鏈)復制的原理,實現目的基因的擴增,該過程首先需要設計引物,國家微生物科學數據中心公布了新冠病毒S蛋白的引物序列,已知其中一段引物的序列為CCCAACTTCTCCTCCTAGAAT,能否根據該引物序列設計出另一段引物的序列?不能不能(填“能”或“不能”),原因是 DNA雙鏈是反向平行的,復制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結合一條鏈的一端,無法據此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列)DNA雙鏈是反向平行的,復制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結合一條鏈的一端,無法據此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列)。目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶熱穩定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活Taq酶熱穩定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活。TaqMan是最為常用的一種具有熒光標記的核酸探針,能與目標基因特異性結合,利用原理是 堿基互補配對原則堿基互補配對原則。
(2)免疫學檢測法:該技術基于血清中抗原和抗體的特異性結合進行檢測。
①制備抗體:可以用到單克隆抗體的相關技術,其過程是取產生免疫反應的 脾(B淋巴)脾(B淋巴)細胞與骨髓瘤細胞混合培養,使其融合,最后篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞,雜交瘤細胞可以在體外進行大規模培養或注射到 小鼠腹腔內小鼠腹腔內,雜交瘤細胞的培養液中需要特殊的成分,通常需要加入 血清、血漿血清、血漿等一些天然成分。
②制備抗原:對新冠病毒的主要結構蛋白基因進行擴增與克隆,構建基因的 表達載體表達載體,導入大腸桿菌得到大量相關蛋白,純化后就可以作為抗原進行檢測。
【考點】單克隆抗體及其應用;DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】反轉錄;載體;受體菌;DNA(雙鏈)復制;不能;DNA雙鏈是反向平行的,復制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結合一條鏈的一端,無法據此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列);Taq酶熱穩定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活;堿基互補配對原則;脾(B淋巴);小鼠腹腔內;血清、血漿;表達載體
【解答】
【點評】
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發布:2024/6/27 10:35:59組卷:6引用:1難度:0.5
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