隨著石油危機的出現，乙醇作為可再生資源中比較理想的液態燃料正受到人們越來越多的關注。自然界中可再生的木質纖維素資源極為豐富，其主要成分之一是半纖維素。半纖維素容易被酸或者酶水解，其水解產物中的85%～90%為木糖。因此利用木糖發酵生產乙醇具有重要的應用研究價值。酵母菌是傳統的乙醇生產菌株，因其缺乏轉化木糖的酶系而不能很好地利用木糖。自然界中某些釀酒酵母能利用木糖進行酒精發酵，某研究小組欲從土壤中分離這種酵母菌并對產酶活性進行測定，實驗基本流程為：
取土樣→制取土壤懸液→擴大培養→選擇培養→菌種分離→酶活性鑒定
請回答下列問題：
（1）擴大培養又稱富集培養，可增加

目的菌株數量

目的菌株數量

，以確保能夠從樣品中分離得到所需要的微生物。
（2）分離純化微生物的關鍵是

逐漸將聚集的菌體分散，以得到由單個細胞增殖而形成的單個菌落

逐漸將聚集的菌體分散，以得到由單個細胞增殖而形成的單個菌落

。該研究小組將擴大培養后的混合菌液適當稀釋后接種于

以木糖為唯一碳源

以木糖為唯一碳源

的選擇培養基，倒置放入培養箱培養。常用的接種方法有

平板劃線法和稀釋涂布平板法

平板劃線法和稀釋涂布平板法

兩種。若劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都長滿了菌落，第二劃線區域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。第二劃線區域的第一條線上無菌落的原因是

接種環灼燒滅菌后未冷卻即進行劃線操作、未從上次劃線末端開劃線

接種環灼燒滅菌后未冷卻即進行劃線操作、未從上次劃線末端開劃線

。
（3）為進一步確定目的菌株的最佳產酶條件，該研究小組選取培養基初始pH、培養溫度、搖床轉速以及裝液量4個因素實驗。其中，培養基初始pH、培養溫度會影響菌株產酶主要是因為

培養基初始pH、培養溫度會影響酶活性

培養基初始pH、培養溫度會影響酶活性

；搖床轉速因影響

溶氧量、菌種獲取營養物質的幾率

溶氧量、菌種獲取營養物質的幾率

進而影響菌株產酶。