RT-PCR是從mRNA獲得cDNA并進行擴增的一種技術。通常要先提取總RNA，然后以其中的mRNA為模板，利用寡脫氧胸苷酸在酶的作用下合成cDNA，再以cDNA為模板進行常規的PCR擴增。
（1）RT-PCR過程中所需要的酶是

逆轉錄酶和（耐熱的）DNA聚合酶

逆轉錄酶和（耐熱的）DNA聚合酶

。擴增得到的目的基因能夠表達的一個關鍵步驟就是有效的轉錄，所以需要將目的基因插入質粒的

啟動子和終止子之間

啟動子和終止子之間

。
（2）寡脫氧胸苷酸是由數量少于20的脫氧胸苷酸連接而成的核苷酸鏈，它可以特異性的結合到mRNA的poly（A）尾端。據此推測，mRNA的poly（A）尾端位于

3'端

3'端

（填“3′端”或“5′端”）。
（3）RT-PCR可提高某些微量RNA病毒的檢測靈敏度，原因是

增加了待測RNA逆轉錄產生的DNA的數量（或濃度），便于檢測

增加了待測RNA逆轉錄產生的DNA的數量（或濃度），便于檢測

。重組新冠疫苗（腺病毒載體）就是利用該技術獲得新冠病毒的S蛋白基因作為目的基因，與剔除了復制相關基因的腺病毒作為載體，制成的腺病毒載體疫苗，該疫苗的優點是

目的基因可以表達S蛋白，進而引起人體發生免疫反應；剔除了復制相關的基因可以避免病毒在人體中復制（增殖）

目的基因可以表達S蛋白，進而引起人體發生免疫反應；剔除了復制相關的基因可以避免病毒在人體中復制（增殖）

。
（4）為使PCR技術擴增的口的基因能夠與載體連接（如圖所示，A、B、C、D為引物），則需要在引物

B和C

B和C

上添加相應的限制酶識別序列。該DNA分子在PCR儀中經過5次循環后會產生等長的目的基因片段

22

22

個。核糖體結合位點（RBS）是影響原核細胞翻譯起始的因素之一，RBS序列位于DNA編碼鏈的

5'端

5'端

（填“3′端”或“5′端”，編碼鏈是模板鏈的互補鏈）。為了使目的基因在大腸桿菌中高效表達，對其編碼序列進行了改造，分析其可能的原因是

UAA的終止效率更高，串聯終止密碼子能夠提高翻譯的有效終止

UAA的終止效率更高，串聯終止密碼子能夠提高翻譯的有效終止

（“UAA”、“UAG”均為終止密碼子）。