（一）草莓是春節(jié)市場上非常受歡迎的一種水果，但卻存在易腐爛，難保存的問題。某科研團隊為了確定腐爛草莓上的菌種類型和探究草莓的新產(chǎn)業(yè)開發(fā)模式，進行了以下一系列的研究。請回答：
（1）科研團隊用棉簽刮取腐爛的草莓表面，然后用

無菌水

無菌水

沖洗棉簽獲得菌懸液，然后利用

稀釋涂布平板法/涂布分離

稀釋涂布平板法/涂布分離

法將其接種至LB固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中出現(xiàn)了均勻分布的單菌落。
（2）腐爛的草莓非常軟爛，原因是微生物產(chǎn)生的

果膠酶

果膠酶

作用后使草莓組織更加松散。為了獲得使草莓變軟的微生物，用接種環(huán)分別刮取LB培養(yǎng)基上菌落的菌種，接種到

以果膠為唯一碳源的

以果膠為唯一碳源的

培養(yǎng)基上，發(fā)現(xiàn)了以下兩種情況：
①LB培養(yǎng)基中的菌落數(shù)量和種類更多，原因是

草莓腐爛處的微生物并非都能產(chǎn)生果膠酶

草莓腐爛處的微生物并非都能產(chǎn)生果膠酶

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②后者培養(yǎng)基上的菌落與在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)時相比，生長狀況不盡相同，可能原因是

菌種對營養(yǎng)物質的需求不同，導致生長狀況不同

菌種對營養(yǎng)物質的需求不同，導致生長狀況不同

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（3）科研團隊為了制成草莓果酒，將草莓放入榨汁機制成黏稠的果醬，然后接種釀酒酵母進行發(fā)酵，結果發(fā)現(xiàn)酒精含量低，且極易造成污染。可以將果醬進行

稀釋和殺菌/滅菌

稀釋和殺菌/滅菌

處理后再用于發(fā)酵。
（二）某種植物的根會產(chǎn)生一種次生代謝產(chǎn)物，該次生代謝產(chǎn)物具有很高的藥用價值。在研究這種次生代謝產(chǎn)物合成的分子機制時發(fā)現(xiàn)，基因A表達沉默時才能產(chǎn)生，且有物質甲存在時會使基因A表達。物質甲在環(huán)境中非常常見，為了實現(xiàn)基因A的沉默，現(xiàn)設計將基因A反向連接到植物基因組中。基因A與Ti質粒結構如下圖所示，箭頭表示轉錄方向。

（4）為了使基因A反向連接到Ti質粒上，選用EcoRI和BamHI酶進行切割并分離獲得A基因，然后加入

DNA連接酶

DNA連接酶

形成重組Ti質粒。為了保證重組Ti質粒在農(nóng)桿菌中的穩(wěn)定存在，需將工程發(fā)根農(nóng)桿菌進行

除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因

除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因

處理。
（5）將含有重組T質粒的發(fā)根農(nóng)桿菌與經(jīng)過創(chuàng)傷處理的外植體共同培養(yǎng)一段時間，然后進行

除菌（不能填滅菌）

除菌（不能填滅菌）

后，在培養(yǎng)基中加入

潮霉素

潮霉素

以篩選出成功導入基因A片段的植物細胞。再轉移至含有

適當配比的營養(yǎng)物質和植物生長調節(jié)劑

適當配比的營養(yǎng)物質和植物生長調節(jié)劑

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到愈傷組織。結果發(fā)現(xiàn)未更換培養(yǎng)基的情況下，就長出了較多的根，可能原因是發(fā)根農(nóng)桿菌的T-DNA中含有

生長素合成酶/生長素合成相關

生長素合成酶/生長素合成相關

基因。
（6）為了檢驗轉基因是否成功，應在

含

含

（填“含”或“不含”）物質甲的培養(yǎng)液中將獲得的根進行水培，發(fā)現(xiàn)只有部分能產(chǎn)生目標次生代謝產(chǎn)物。部分根無法產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物的可能原因是

反接的基因A未成功表達

反接的基因A未成功表達

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