IKK激酶參與動物體內免疫細胞的分化。臨床上發現某重癥聯合免疫缺陷（SCID）患兒KK基因編碼區第1183位堿基T突變為C，導致IKK上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發病機制，研究人員利用純合野生鼠應用大引物PCR定點誘變技術培育出SCID模型小鼠（純合），主要過程如圖1、2。分析回答：

（1）在PCR反應體系中，需加入引物、IKKB基因、緩沖液、Mg²⁺等外，還需加入

Taq酶/耐高溫DNA聚合酶/熱穩定DNA聚合酶、4種脫氧核苷酸（dNTP）

Taq酶/耐高溫DNA聚合酶/熱穩定DNA聚合酶、4種脫氧核苷酸（dNTP）

等。
（2）在圖1獲取突變基因過程中，需要以下3種引物：

引物A	5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′（下劃線字母為突變堿基）
引物B	5′-TAAGCTTCGAACATCCTA--3′（下劃線部分為限制酶HindⅢ識別序列）
引物C	5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下劃線部分為限制酶SacⅠ識別序列）

則PCR1中使用的引物有

引物A和引物B

引物A和引物B

，PCR2中使用的引物有

引物C

引物C

和圖中大引物的

②

②

（①②）鏈。
（3）PCR的反應程序為：94℃3min；94℃30s,58℃30s,72℃50s,30個循環。在循環之前的94℃3min處理為預變性；循環中72℃處理的目的是

Taq酶從引物起始進行互補鏈合成

Taq酶從引物起始進行互補鏈合成

。
（4）據圖2分析代孕母鼠對移入子宮的胚胎基本不發生免疫反應，這為

胚胎在受體內存活

胚胎在受體內存活

提供了可能。
（5）研究人員經鑒定、篩選獲得一只轉基因雜合鼠F₀，并確認突變基因已經穩定同源替代IKK基因，請你設計完成獲得SCID模型鼠的實驗步驟：
①雜交親本：

F₀×野生鼠

F₀×野生鼠

，雜交得F₁；
②F₁雌雄鼠隨機交配得F₂；
③提取F₂每只小鼠的基因組DNA，采用分子生物學方法，利用TKK基因探針和突變基因探針進行篩選，則

IKK基因探針檢測未出現雜交帶，突變基因探針檢測出現雜交帶

IKK基因探針檢測未出現雜交帶，突變基因探針檢測出現雜交帶

為模型鼠。