蘇云金芽孢桿菌中含有一種抗蟲基因（Bt基因），通過產(chǎn)生蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白（Bt抗蟲蛋白），破壞鱗翅目昆蟲的消化系統(tǒng)來殺死棉鈴蟲。科學家將該細菌的“殺蟲基因”轉(zhuǎn)到棉花里，培育出了抗蟲棉，讓棉花也能產(chǎn)生Bt抗蟲蛋白抵抗蟲害。回答下列問題：
（1）可利用PCR技術(shù)獲取并擴增Bt基因，前提是要有一段Bt基因的核苷酸序列，這是因為

有一段Bt基因的核苷酸序列才能設計引物

有一段Bt基因的核苷酸序列才能設計引物

。
（2）PCR與體內(nèi)DNA復制相比，其特殊之處有

離體條件、無需解旋酶、需要高溫、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

離體條件、無需解旋酶、需要高溫、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

（寫出兩點）。若要由1個DNA分子復制8次，需要引物的數(shù)量為

254

254

個。
（3）Bt基因兩端的酶切位點如圖甲所示，圖乙中質(zhì)粒表達載體上的amp^R為青霉素抗性基因，tet^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，小箭頭表示酶切位點。

實際操作中，一般EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶進行切割，與只采用EcoRⅠ切割相比，用兩種酶切的優(yōu)勢一是避免

防止目的基因DNA片段和質(zhì)粒自身環(huán)化

防止目的基因DNA片段和質(zhì)粒自身環(huán)化

，二是避免造成反向連接。反向連接會導致目的基因表達出不同的蛋白質(zhì)，原因是

轉(zhuǎn)錄是從啟動子開始，到終止子結(jié)束，反向連接轉(zhuǎn)錄出的RNA序列不同，對應的氨基酸序列不同

轉(zhuǎn)錄是從啟動子開始，到終止子結(jié)束，反向連接轉(zhuǎn)錄出的RNA序列不同，對應的氨基酸序列不同

。
（4）將基因表達載體導入農(nóng)桿菌后，要用選擇培養(yǎng)基進行篩選。已知未導入表達載體時農(nóng)桿菌對青霉素和四環(huán)素均不具抗性，在不含抗生素的培養(yǎng)基（標記為A）中有經(jīng)過轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌單菌落（由一個菌體繁殖而成），挑取一部分菌接種到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基（標記為A₁）中培養(yǎng)，再挑取一部分菌接種到含有青霉素的培養(yǎng)基（標記為A₂）中培養(yǎng)，若出現(xiàn)

A₁上形成菌落，A₂上不形成菌落

A₁上形成菌落，A₂上不形成菌落

結(jié)果，說明轉(zhuǎn)化成功。
（5）轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還要對棉花進行

個體

個體

水平的檢驗。