棉鈴蟲和蚜蟲是常見的植物害蟲，Cry1A基因的表達產物對棉鈴蟲等鱗翅目昆蟲有較強的毒性，GNA基因的表達產物對蚜蟲等刺吸式口器的昆蟲有較強的毒性?？蒲腥藛T將Cry1A基因與GNA基因連接在一起，構建了雙抗蟲基因的重組表達載體，并轉入煙草細胞，獲得了具有雙抗性的轉基因煙草，其部分過程如圖1所示，請分析并回答以下問題：
注：Klenow能將黏性末端轉變為平末端；圖中不同限制酶切出的黏性末端均不同。
（1）過程③將Cry1A基因與GNA基因相連，可選用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（“E?coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（2）過程④應該選用 EcoRⅠ和HindⅢEcoRⅠ和HindⅢ（填圖中限制酶）切割植物表達載體，以便和目的基因相連，形成重組表達載體。
（3）將重組表達載體轉入農桿菌之前，一般先用 Ca2+Ca2+處理農桿菌，使其成為感受態細胞。
（4）讓農桿菌侵染煙草葉片前，需要通過實驗篩選農桿菌：將培養農桿菌的培養基倒平板后均分為A、B兩組，在A組培養基中涂布一定量的鏈霉素，在B組培養基中涂布等量的卡那霉素和鏈霉素。往A組培養基中接種適量農桿菌，待長出菌落后，用影印法接種到B組培養基上，實驗結果如圖2，其中 1、31、3（填圖中對應的數字）菌落對應的農桿菌可能是符合要求的，即含有 重組表達載體重組表達載體的農桿菌。
（5）通過植物組織培養技術培養農桿菌侵染的煙草葉片，獲得煙草幼苗。欲從個體水平檢測這些植株是否成功導入目的基因，方法是 將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉基因植株上，觀察是否抗蟲將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉基因植株上，觀察是否抗蟲。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】T4DNA連接酶；EcoRⅠ和HindⅢ；Ca2+；1、3；重組表達載體；將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉基因植株上，觀察是否抗蟲
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：3難度：0.7
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6