為提高作物產量，種植業往往使用大量的氮素化肥，既增加了生產成本，又易造成環境污染。自生固氮菌營獨立生活，為改變這種現狀帶來了希望。某科研小組利用下面的培養基嘗試從土壤中分離固氮能力強的自生固氮菌，以便生產菌肥替代傳統化肥。請回答下列問題：
培養基配方表：

成分	葡萄糖	KH2PO4	MgSO4	NaCl	CaSO4	CaSO3	瓊脂	蒸餾水
用量	10g	0.2g	0.2g	0.2g	0.2g	5g	3.5g	1L

（1）配制培養基時，按配方表稱量、溶化、定容后需經

高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌

法滅菌后再倒平板。此培養基能分離自生固氮菌的原因是

該培養基無氮源，只有固氮菌才能在此培養基上生長

該培養基無氮源，只有固氮菌才能在此培養基上生長

。
（2）為分離純化自生固氮菌及觀察自生固氮菌的菌落特征，需將土樣經

梯度稀釋

梯度稀釋

后，用滅菌后的

接種環

接種環

（填接種工具名稱）采用

平板劃線法

平板劃線法

 將菌液接種到平板上培養。
（3）已知固氮酶的化學本質為蛋白質，不同的蛋白質在不同濃度的鹽溶液中溶解度不同。為檢測分離得到的自生固氮菌的固氮酶活性，可將固氮菌細胞破碎后采用

鹽析

鹽析

法 分離出固氮酶，該方法的優點是

既能分離出固氮酶，又不會破壞固氮酶的結構而保持其活性

既能分離出固氮酶，又不會破壞固氮酶的結構而保持其活性

。
（4）研究發現，土壤中碳含量降低，碳氮比低于40：1時，固氮菌的固氮作用迅速停止。因此純化后制作的優良菌肥最好與

有機肥

有機肥

 （填“氮肥”“磷肥”“鉀肥”或“有機肥”）配合施用。