苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學家將正常基因D導入該病患者的細胞，以治療該病。圖甲為A、B、C三種質粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環素抗性基因，LacZ基因編碼產生的酶可以分解物質X-gal,從而使菌落顯現出藍色。若無該基因或該基因被破壞，則菌落呈白色。，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）為限制酶及其切割位點與復制原點之間的距離。回答下列問題：
（1）基因工程操作的核心步驟是 基因表達載體的構建基因表達載體的構建。圖甲中三種質粒適宜作為運載體的是質粒 BB。
（2）獲取目的基因D時應選擇乙圖中的 PvuⅠPvuⅠ對其所在的DNA進行切割。
（3）將目的基因D和甲圖中相應質粒連接后，得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質粒，使用 EcoRⅠEcoRⅠ對質粒完全酶切后，進行電泳分析。若是正向連接載體，電泳圖譜中出現長度為 1.21.2Kb和 5.55.5Kb兩條帶。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，要在已轉化的含重組質粒、已轉化的含空質粒的受體細胞和未轉化成功的細胞中篩選出已轉化的含重組質粒的受體細胞的方法是在含有 氨芐青霉素氨芐青霉素和 X-galX-gal的培養基上培養，形成 白色白色（填“藍色”或“白色”）菌落的為導入重組質粒的受體細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體的構建；B；PvuⅠ；EcoRⅠ；1.2；5.5；氨芐青霉素；X-gal；白色
【解答】
【點評】
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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