人工合成的Bt-Cry5Aa基因編碼一種毒蛋白可殺死棉鈴蟲。研究者將Bt-Cry5Aa基因轉(zhuǎn)入棉花，并對(duì)棉花的抗蟲性進(jìn)行鑒定和遺傳分析。
（1）用 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶酶將Bt-Cry5Aa基因與質(zhì)粒（其標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因）連接構(gòu)建重組DNA，然后用 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法/花粉管通道法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法/花粉管通道法法將其導(dǎo)入普通棉花中，獲得T0代植株。
（2）提取T0代棉花的總DNA，依據(jù)Bt-Cry5Aa基因的堿基序列設(shè)計(jì) 引物引物，對(duì)T0代植株進(jìn)行PCR檢測(cè)分析，結(jié)果如圖。其中4號(hào)和6號(hào)是 不含目的基因不含目的基因植株的檢測(cè)結(jié)果。將棉鈴蟲接種于不同株系的植株上，7號(hào)植株表現(xiàn)為非抗蟲，但PCR檢測(cè)結(jié)果為 陽性/含目的基因陽性/含目的基因，請(qǐng)分析可能的原因是 Bt—Cry5Aa基因突變或Bt—Cry5Aa基因表達(dá)效率太低Bt—Cry5Aa基因突變或Bt—Cry5Aa基因表達(dá)效率太低。
（3）取T0代抗蟲棉自交獲得種子，種植后獲得T1代植株845株，經(jīng)卡那霉素點(diǎn)涂葉片（卡那霉素能引起普通植株綠色器官黃化），未出現(xiàn)黃化現(xiàn)象的植株有630株，據(jù)此可知抗蟲棉與非抗蟲棉的比約為 3：13：1，其遺傳遵循 基因分離基因分離定律。
（4）提取T1代抗蟲植株不同發(fā)育時(shí)期組織器官的蛋白質(zhì)，檢測(cè)毒蛋白的表達(dá)量。經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn) 隨著棉花植株的生長(zhǎng)發(fā)育，植株中的Bt毒蛋白含量下降隨著棉花植株的生長(zhǎng)發(fā)育，植株中的Bt毒蛋白含量下降，說明抗蟲棉對(duì)棉鈴蟲的殺蟲效果隨棉株的生長(zhǎng)發(fā)育而呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。
（5）綜上可知，科研人員在 分子水平和個(gè)體分子水平和個(gè)體水平上對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉進(jìn)行了檢測(cè)與鑒定。
（6）生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因棉花與非轉(zhuǎn)基因棉花混合播種，其目的是 減緩害蟲種群抗Bt毒蛋白基因頻率的增加速度減緩害蟲種群抗Bt毒蛋白基因頻率的增加速度。
【答案】限制酶和DNA連接酶；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法/花粉管通道法；引物；不含目的基因；陽性/含目的基因；Bt—Cry5Aa基因突變或Bt—Cry5Aa基因表達(dá)效率太低；3：1；基因分離；隨著棉花植株的生長(zhǎng)發(fā)育，植株中的Bt毒蛋白含量下降；分子水平和個(gè)體；減緩害蟲種群抗Bt毒蛋白基因頻率的增加速度
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：57引用：1難度：0.3
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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