乙肝病毒（HBV）的基因X是乙肝病毒復制和擴散所必需的基因，在乙肝慢性化和肝癌的發生中具有重要作用，如圖是乙型肝炎病毒的X基因真核表達載體的構建及其在畢赤酵母中的表達過程，圖中所示PUCori為質粒復制原點。請回答下列問題：
（1）酵母是低等真核生物，除了具有細胞生長快，易于培養，遺傳操作簡單等原核生物具有的特點外，又具有真核生物表達蛋白質后進行的加工、修飾、合理的空間折疊加工、修飾、合理的空間折疊等功能。畢赤酵母菌的質粒帶有Zeo基因（博來霉素抗性基因）可作為基因工程中的標記標記基因，用PCR方法擴增X基因序列，此過程需要DNA聚合酶DNA聚合酶酶的催化，并分別在上下游引入XbaⅠ和XhoⅠXbaⅠ和XhoⅠ酶切位點。
（2）雙酶切目的基因X與載體，可避免目的基因和載體自連以及目的基因和載體反向連接目的基因和載體自連以及目的基因和載體反向連接，再用DNA連接酶DNA連接酶酶可構建得到HBVX蛋白畢赤酵母表達載體。將畢赤酵母經山梨醇處理成感受態感受態細胞后，把該表達載體導入畢赤酵母細胞內，可先用博來霉素博來霉素進行篩選后再進行基因X的檢測和鑒定，采用DNA分子雜交DNA分子雜交技術，用同位素標記的目的基因X同位素標記的目的基因X做探針，若結果顯示了雜交帶，表明目的基因X進入了畢赤酵母細胞內；經過抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術結果顯示含有重組畢赤酵母可以分泌表達X蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】加工、修飾、合理的空間折疊；標記；DNA聚合酶；XbaⅠ和XhoⅠ；目的基因和載體自連以及目的基因和載體反向連接；DNA連接酶；感受態；博來霉素；DNA分子雜交；同位素標記的目的基因X；抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：3難度：0.7
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2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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