在一定劑量范圍內苜蓿中的黃酮對動物乳腺上皮細胞增殖具有一定促進作用。為研究不同濃度苜蓿黃酮對乳腺上皮細胞的增殖及其對乳酸脫氫酶（LDH）活性的影響，科研人員用MTT法以細胞懸液OD值為觀測指標測定細胞增殖能力，進行了相關實驗研究。請完善實驗思路，并根據實驗結果進行分析。
實驗材料與儀器：
用二甲基亞砜（DMSO）配制的濃度為25、50、75和100μ/mL苜蓿黃酮溶液、用動物細胞培養液配制的一定密度的動物乳腺上皮細胞懸液、光電比色計、MTT法細胞增殖測定儀器等
（要求與說明：MTT法測定細胞增殖具體操作不作要求；乳酸脫氫酶（LDH）活性檢測不作要求；在一定細胞數范圍內，OD值與細胞數成正比；培養過程中培養液變化忽略不計；實驗條件適宜）
（1）完善實驗思路
①取若干培養瓶，各加入998mL的細胞懸液，分為5組，編號甲～戊，每組5個重復。
②甲組：加入2mL二甲基亞礬；

實驗組乙～戊：分別加入等量的用二甲基亞砜配制的濃度為25、50、75和100μg/mL的苜蓿黃酮

實驗組乙～戊：分別加入等量的用二甲基亞砜配制的濃度為25、50、75和100μg/mL的苜蓿黃酮

。
③

細胞培養到第3天和第5天時，分別用MTT法測各組細胞懸液OD值，取平均值并記錄

細胞培養到第3天和第5天時，分別用MTT法測各組細胞懸液OD值，取平均值并記錄

。
④實驗第5天，

測各組乳酸脫氫酶（LDH）的活性，取平均值并記錄

測各組乳酸脫氫酶（LDH）的活性，取平均值并記錄

。
⑤

統計、比較、分析實驗結果

統計、比較、分析實驗結果

。
（2）結果分析與結論
苜蓿黃酮對某動物乳腺上皮細胞增殖及其乳酸脫氫酶（LDH）活性的影響

項目	時間/d	甲組	乙組 25μg/mL	丙組 50μg/mL	丁組 75μg/mL	戊組 100μg/mL
細胞增殖	3	0.37	0.38	0.38．	0.37	0.37
細胞增殖	5	0.39	0.39	0.41*	0.46*	0.40*
乳酸脫氫酶活性	5	1078.80	675.60*	573.21*	1138.04	796.89*

注：表中*表示與對照組機比有統計學上的顯著差異，不帶*數據表示與對照組無顯著差異；（單位：略）
根據如表可得實驗結論：
結論一：作用時間較短時（3天），苜蓿黃酮對細胞增殖無明顯作用；
結論二：

隨著培養時間加長（5天），較高濃度的苜蓿黃酮對細胞增殖有明顯促進作用

隨著培養時間加長（5天），較高濃度的苜蓿黃酮對細胞增殖有明顯促進作用

；
結論三：

在較低濃度或較高濃下，苜蓿黃酮顯著提高乳腺上皮細胞中的乳酸脫氫酶的活性

在較低濃度或較高濃下，苜蓿黃酮顯著提高乳腺上皮細胞中的乳酸脫氫酶的活性

。
（3）實驗分析
細胞呼吸中，乳酸脫氫酶（LDH）催化的反應

不產生

不產生

（填“產生”或“不產生”）ATP，這一催化反應發生在

厭氧

厭氧

（填“需氧”或“厭氧”）呼吸中。本實驗中還可用細胞培養上清液中LDH的濃度代表細胞的受損程度的原因是

正常情況下LDH分布在細胞內，只有當細胞受損時乳酸脫氫酶（LDH）才能釋放出來，且受損越嚴重，釋放出來的LDH越多

正常情況下LDH分布在細胞內，只有當細胞受損時乳酸脫氫酶（LDH）才能釋放出來，且受損越嚴重，釋放出來的LDH越多

。為減少微生物對實驗結果帶來的干擾，實驗中的動物細胞培養基中添加的胎牛血清可采用

過濾（或增加抗生素）

過濾（或增加抗生素）

（方法）去除雜菌。