人類γ基因啟動子上游的調控序列中含有BCL11A蛋白結合位點，該位點結合BCL11A蛋白后，基因的表達被抑制。通過改變該結合位點的序列，解除對基因表達的抑制，可對某種地中海貧血癥進行基因治療。科研人員擴增了基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達載體中進行轉化和熒光檢測，以確定BCL11A蛋白結合位點的具體位置。相關信息如圖所示。
γ
（1）為將擴增后的產物定向插入載體指導熒光蛋白基因表達，需在引物末端添加限酶識別序列。據圖可知，在F1～F7末端添加的序列所對應的限制酶是 SalⅠSalⅠ，在R末端添加的序列所對應的限制酶是 EcoRⅠEcoRⅠ。本實驗中，從產物擴增到載體構建完成的整個過程具體需要 66種酶，它們分別是 Taq酶、限制酶EcoRⅠ、限制酶SalⅠ、限制酶MunⅠ、限制酶XhoⅠ、DNA連接酶Taq酶、限制酶EcoRⅠ、限制酶SalⅠ、限制酶MunⅠ、限制酶XhoⅠ、DNA連接酶。
（2）將構建的載體導入除去BCL11A基因的受體細胞，成功轉化后，含F1～F6與擴增產物的載體表達熒光蛋白，受體細胞有熒光，含F7與R擴增產物的受體細胞無熒光。含F7與R擴增產物的受體細胞無熒光的原因是 F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達。
（3）向培養液中添加適量的雌激素，含F1～F4與R擴增產物的受體細胞不再有熒光，而含F5～F6與R擴增產物的受體細胞仍有熒光，F7與R擴增產物的受體細胞不再有熒光。若基因上游調控序列上與引物序列所對應的位置不含有BCL11A蛋白的結合位點γ序列，據此結果可推測，BCL11A蛋白結合位點位于 引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上，理由是 根據有無熒光情況判斷，F1～F4與R擴增產物上均有結合位點，因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游（右側）；F5～F6與R擴增產物上均無結合位點，可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游（左側），所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上根據有無熒光情況判斷，F1～F4與R擴增產物上均有結合位點，因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游（右側）；F5～F6與R擴增產物上均無結合位點，可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游（左側），所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】SalⅠ；EcoRⅠ；6；Taq酶、限制酶EcoRⅠ、限制酶SalⅠ、限制酶MunⅠ、限制酶XhoⅠ、DNA連接酶；F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達；引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上；根據有無熒光情況判斷，F1～F4與R擴增產物上均有結合位點，因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游（右側）；F5～F6與R擴增產物上均無結合位點，可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游（左側），所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：1難度：0.5
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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