某一質粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導致相應的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環素抗性基因）。有人將此質粒載體用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應，用得到的混合物直接轉化大腸桿菌，結果大腸桿菌有的未被轉化，有的被轉化。被轉化的大腸桿菌有三種，分別是含有環狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌。回答下列問題：

（1）質粒載體作為基因工程的工具，應具備的基本條件有

能自我復制

能自我復制

、

具有標記基因（有一個或多個限制酶切割位點）

具有標記基因（有一個或多個限制酶切割位點）

（答出兩點即可）。而作為基因表達載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子。
（2）如果用含有氨芐青霉素的培養基進行篩選，在上述四種大腸桿菌細胞中，未被轉化的和僅含有環狀目的基因的細胞是不能區分的，其原因是①

二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均不生長

二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均不生長

；并且②

含有質粒載體

含有質粒載體

和③

含有插入了目的基因的重組質粒

含有插入了目的基因的重組質粒

的細胞也是不能區分的，其原因是④

二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均能生長

二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均能生長

。在上述篩選的基礎上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用⑤

含有四環素

含有四環素

的固體培養基。