某研究團隊從沙漠野生檉柳中克隆出了一個耐鹽堿基因TcSR1。該團隊用限制酶BalⅡ切割目的基因TcSR1，用限制酶BamHⅠ切割質粒載體V3，兩種限制酶的識別序列及酶切位點如圖所示，經過體外重組和轉化，最終獲得了能夠在鹽堿地生長的楊樹新品種。回答下列問題：
（1）使用 PCRPCR技術在體外擴增耐鹽堿基因TcSR1，擴增時需要 22種引物。基因TcSR1不直接導入楊樹細胞，原因是 目的基因無復制原點；無標記基因，無法鑒定受體細胞是否導入目的基因；目的基因無法在受體細胞中穩定存在目的基因無復制原點；無標記基因，無法鑒定受體細胞是否導入目的基因；目的基因無法在受體細胞中穩定存在（答出兩點即可）。
（2）用限制酶BalⅡ切割目的基因和用限制酶BamHⅠ切割質粒載體V3后，再用 DNA連接DNA連接酶處理，以構建基因表達載體，該表達載體不能夠被BalⅡ或BamHⅠ識別并切割，原因是 連接后的序列無BalⅡ或BamHⅠ可識別的特定堿基序列（或DNA分子序列發生了改變，重組分子不能被BalⅡ或BamHⅠ識別和切割）連接后的序列無BalⅡ或BamHⅠ可識別的特定堿基序列（或DNA分子序列發生了改變，重組分子不能被BalⅡ或BamHⅠ識別和切割）。
（3）將目的基因導入楊樹細胞，培育后篩選轉化陽性的植株。若要檢測楊樹植株中目的基因TcSR1是否發生轉錄，可采用 分子雜交分子雜交技術，需要將 放射性同位素標記的基因TcSR1放射性同位素標記的基因TcSR1片段制成探針，通過檢測放射性達到目的。
（4）為進一步研究轉基因楊樹的耐鹽堿機制，還需要進一步開展研究，實驗思路是通過 植物組織培養植物組織培養技術獲得大量轉基因植物，然后 在高鹽堿脅迫下觀察楊樹植株的生長狀況在高鹽堿脅迫下觀察楊樹植株的生長狀況。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；2；目的基因無復制原點；無標記基因，無法鑒定受體細胞是否導入目的基因；目的基因無法在受體細胞中穩定存在；DNA連接；連接后的序列無BalⅡ或BamHⅠ可識別的特定堿基序列（或DNA分子序列發生了改變，重組分子不能被BalⅡ或BamHⅠ識別和切割）；分子雜交；放射性同位素標記的基因TcSR1；植物組織培養；在高鹽堿脅迫下觀察楊樹植株的生長狀況
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：13引用：1難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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