四尾柵藻生長周期短、適應性強，是一種高潛力生物柴油新型原料，但油脂產量低。研究人員從含油量高的紫蘇中提取DGAT1（催化油脂合成的關鍵酶）基因，并成功導入到四尾柵藻細胞內，獲得轉基因的產油四尾柵藻。其制備流程如圖所示，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，LacZ基因可使細菌利用培養基中的物質X-gal進而使菌落呈現藍色，無該基因或該基因被破壞，菌落呈白色。請分析回答下列問題：
（1）從高表達的紫蘇組織細胞中提取總的RNA，在 逆轉錄逆轉錄酶作用下獲得cDNA，用于PCR擴增。該過程獲得cDNA的原理是 以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA。
（2）PCR擴增DGATI基因時，使反應體系中的模板cDNA解旋為單鏈的條件是 加熱至90～95℃加熱至90～95℃。在DNA延伸的過程中，使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶熱穩定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活Taq酶熱穩定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活。
（3）構建的pMD19-DGAT1導入到經 CaCl2CaCl2溶液處理的感受態大腸桿菌細胞中，并接種到含 X-gal和氨芐青霉素X-gal和氨芐青霉素的培養基中培養。一段時間后，挑選 白白色的菌落以提取質粒pMD19-DGAT1。
（4）用限制酶BamHⅠ和XbaⅠ切割pMD19-DGAT1和pBI121，將其連接成重組表達載體pBI121-DGAT1，并將其導入四尾柵藻細胞中。與單酶切相比，雙酶切的優點是 使DGAT1基因能定向插入表達載體，減少自身環化使DGAT1基因能定向插入表達載體，減少自身環化。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】逆轉錄；以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA；加熱至90～95℃；Taq酶熱穩定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活；CaCl2；X-gal和氨芐青霉素；白；使DGAT1基因能定向插入表達載體，減少自身環化
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6