M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達。現設計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過特定生物學技術獲得M基因失活的轉基因克隆動物A，流程如圖所示。回答下列問題：
（1）在構建含有片段F的重組質粒過程中，切割質粒DNA的工具酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷開。
（2）在無菌、無毒等適宜環境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養時，都要用到胰蛋白酶，作用分別是 將組織分散成細胞將組織分散成細胞、使細胞從瓶壁上脫落使細胞從瓶壁上脫落。培養過程中，需要定期更換培養液，目的有 清除代謝物（，防止對細胞造成危害）清除代謝物（，防止對細胞造成危害）、給細胞補充營養給細胞補充營養。
（3）與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率更低，原因是 體細胞分化程度高，恢復全能性困難體細胞分化程度高，恢復全能性困難。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞，功能上具有全能性全能性。
（4）鑒定轉基因動物：以免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的 單克隆抗體單克隆抗體。簡要寫出利用其確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路：分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質，進行抗原——抗體雜交分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質，進行抗原——抗體雜交。
（5）獲得克隆動物A時，除了轉基因技術，還涉及的生物學技術有 動物細胞培養、核移植、胚胎移植動物細胞培養、核移植、胚胎移植。
【答案】磷酸二酯鍵；將組織分散成細胞；使細胞從瓶壁上脫落；清除代謝物（，防止對細胞造成危害）；給細胞補充營養；體細胞分化程度高，恢復全能性困難；全能性；單克隆抗體；分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質，進行抗原——抗體雜交；動物細胞培養、核移植、胚胎移植
【解答】
【點評】
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