為提高小對磷元素的吸收能力，研究人員通過質粒P把水稻耐低磷因導入小麥細胞得到耐低磷轉基因小麥，基本流程如圖。質粒P含3種限制酶（NheⅠ、EcoRⅠ、SalⅠ）切割位點，全部切割可以得到F1、F2、F3、F4片段，標記基因和啟動子分別位F1和F2片段中。耐低磷基因兩側的限制酶切割位點為NheⅠ和SalⅠ，據圖回答下列問題：
（1）將目的基因導入植物細胞采用最多的方法是農桿菌轉化農桿菌轉化法，還有基因槍法和我國科學家獨創的花粉管通道花粉管通道法。
（2）有人將質粒P用NheⅠ與SalⅠ雙酶切割后，與耐低磷基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應，得到的重組質粒不一定都是所需要的，原因是質粒P有兩個NheⅠ的酶切位點，得到的重組質粒可能有：①只含F4和耐低磷基因②只含F3和耐低磷基因③F4、耐低磷基因和F2-F1片段（反向連接）④F3、耐低磷基因和F2-F1片段（反向連接）⑤F3、耐低磷基因和F1-F2片段。不符合要求質粒P有兩個NheⅠ的酶切位點，得到的重組質粒可能有：①只含F4和耐低磷基因②只含F3和耐低磷基因③F4、耐低磷基因和F2-F1片段（反向連接）④F3、耐低磷基因和F2-F1片段（反向連接）⑤F3、耐低磷基因和F1-F2片段。不符合要求。因此，需采取以下步驟進行重組質粒的構建：
第一步，取質粒P用EcoRⅠEcoRⅠ和SalⅠSalⅠ酶切測，從中選取F1+F4F1+F4片段備用；
第二步，另取質粒P用EcoRⅠEcoRⅠ和NheⅠNheⅠ酶切割，從中選取FρFρ片段備用；
第三步，將耐低磷基因與前兩步選取的片段用DNA連接酶連接即可得到所需重組質粒。
（3）剝取小麥種子的幼胚接種在誘導培養基上經脫分化脫分化形成愈傷組織，該過程需要的植物激素有細胞分裂素和生長素細胞分裂素和生長素，將重組質粒導入愈傷組織，培養一段時間后，還需要轉移至分化分化培養基上。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】農桿菌轉化；花粉管通道；質粒P有兩個NheⅠ的酶切位點，得到的重組質粒可能有：①只含F4和耐低磷基因②只含F3和耐低磷基因③F4、耐低磷基因和F2-F1片段（反向連接）④F3、耐低磷基因和F2-F1片段（反向連接）⑤F3、耐低磷基因和F1-F2片段。不符合要求；EcoRⅠ；SalⅠ；F1+F4；EcoRⅠ；NheⅠ；Fρ；脫分化；細胞分裂素和生長素；分化
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：16引用：2難度：0.5
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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