干擾素是一種重要的免疫活性物質，具有抗病毒、調節(jié)免疫等功效。如圖是研究人員利用基因工程生產(chǎn)人干擾素的三種方法。請回答下列問題：

第一種方法是利用基因工程通過培育山羊乳腺生物反應器大量生產(chǎn)干擾素。
（1）基因工程獲取的人干擾素基因一般來自cDNA文庫，獲取的目的基因可通過

PCR技術

PCR技術

大量擴增，擴增需要的條件有模板DNA、dNTP、引物、

耐高溫的DNA聚合酶

耐高溫的DNA聚合酶

、高溫等。
（2）重組人干擾素基因表達載體由山羊酪蛋白基因啟動子，人干擾素基因，標記基因和終止等組成，其中

山羊酪蛋白基因啟動子

山羊酪蛋白基因啟動子

決定了人干擾素基因只能在山羊乳腺細胞中特異性表達。一般需要將重組人干擾素基因表達載體導入

雌性

雌性

（填“雄性”或“雌性”）胚胎細胞中。在轉基因羊發(fā)育成熟時，為了檢測羊奶中是否有人干擾素，可用

抗原—抗體雜交技術

抗原—抗體雜交技術

方法。
第二種方法是利用蛋白質工程來合成干擾素。
（3）如果我們采用蛋白質工程來合成人干擾素，可以通過

改造或合成基因

改造或合成基因

，對現(xiàn)有蛋白質進行改造，或制造新的蛋白質，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需要。
第三種方法是利用基因工程通過大腸桿菌來生產(chǎn)干擾素。
（4）具體做法是將產(chǎn)生干擾素的人白細胞的mRNA分離，反轉錄得到干擾素基因。將含有四環(huán)素、氨芐青霉素抗性基因的質粒PBR322和干擾素基因進行雙酶切，用DNA連接酶連接。將重組載體DNA分子在一定條件下導入大腸桿菌，在培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)，檢測干擾素的表達量，選出高效表達的工程菌。據(jù)圖分析，構建重組載體DNA分子時，可以選用

酶B與酶C

酶B與酶C

兩種限制酶對質粒pBR322和干擾素基因進行雙酶切，目的是既能保證目的基因和質粒正向連接，又能防止

目的基因或載體的自身連接

目的基因或載體的自身連接

（答1點）。將重組質粒導入大腸桿菌中，然后將細菌涂布到含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，就可得到含質粒PBR322或重組質粒的細菌單菌落。