多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果膠使細胞壁破損。成熟的番茄果實中，PG合成顯著增加，能使果實變紅變軟，但不利于保鮮。利用基因工程減少PG基因的表達，可延長果實保質期。科學家將PG基因反向接到Ti質粒上，導入番茄細胞中，得到轉基因番茄，具體操作流程如圖。據圖回答下列問題：
（1）若已獲取PG的mRNA，可通過逆轉錄法逆轉錄法獲取PG基因。已知BamHI的識別序列如圖2甲所示，請在圖2乙相應位置畫出目的基因兩側的黏性末端。
。
（2）用含目的基因的農桿菌感染番茄原生質體后，可用含有卡那霉素卡那霉素的培養基進行篩選，理由是重組質粒中含卡那霉素抗性基因而四環素抗性基因被破壞重組質粒中含卡那霉素抗性基因而四環素抗性基因被破壞。之后，還需將其置于質量分數為0.3g/ml的蔗糖溶液中，觀察細胞是否發生質壁分離是否發生質壁分離現象來鑒別細胞壁是否再生。
（3）由于導入的目的基因能轉錄出反義RNA，且能與天然的PG基因轉錄的mRNA天然的PG基因轉錄的mRNA互補結合，因此可抑制PG基因的正常表達。若番茄果實的保質期延長番茄果實的保質期延長，則可確定轉基因番茄培育成功。
（4）將轉入反向鏈接PG基因的番茄細胞培育成完整的植株，需要用植物組織培養植物組織培養技術；其中，愈傷組織經再分化再分化形成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加植物激素植物激素。
（5）某地開展以轉基因番茄種植為核心的生態農業建設，利用其秸稈發酵制酒，酒糟喂牛，牛糞和一些番茄的葉片等做沼氣池的原料，沼氣用于燃燒，沼渣肥田提高番茄產量，該生態系統主要利用的生態農業原理有物質循環再生、能量多級利用物質循環再生、能量多級利用。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉錄法；；卡那霉素；重組質粒中含卡那霉素抗性基因而四環素抗性基因被破壞；是否發生質壁分離；天然的PG基因轉錄的mRNA；番茄果實的保質期延長；植物組織培養；再分化；植物激素；物質循環再生、能量多級利用
；卡那霉素；重組質粒中含卡那霉素抗性基因而四環素抗性基因被破壞；是否發生質壁分離；天然的PG基因轉錄的mRNA；番茄果實的保質期延長；植物組織培養；再分化；植物激素；物質循環再生、能量多級利用【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：18引用：4難度：0.6
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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