研究表明來源于大腸桿菌的蘇氨酸輸出蛋白（由rhtA基因編碼）能夠識別5-氨基乙酰丙酸，并將其輸出至細胞外。為探究蘇氨酸輸出蛋白對5-氨基丙酸合成的影響，研究人員從大腸桿菌的基因組DNA中擴增出rhtA基因，并構建出相應的重組質粒，獲得轉rhtA基因的工程菌，其基本操作流程如圖1所示，已知引物A、B的序列分別是：5′-AGGAAACAGACCATGGAATTCATGCCTGGTTCATTACGTAAAATG-3′、5′-GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTC-3′。
回答下列問題：
（1）由圖可知，獲取大量rhtA基因要經PCR技術擴增，若要擴增出N個rhtA基因，需要引物A、B各 N-1N-1個，對引物A的設計要求是 不能自身成環、不能與引物B互補配對、長度要適中不能自身成環、不能與引物B互補配對、長度要適中（答出2點即可）；通過過程①得到重組質粒，需選用的兩種限制酶是 EcoRⅠ和HindⅠEcoRⅠ和HindⅠ，兩者起作用部位的化學鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（2）過程②⑤在操作時，一般需用鈣離子處理大腸桿菌細胞，使細胞處于一種 感受態細胞感受態細胞的生理狀態。過程③將大腸桿菌體內的質粒提取出來進行驗證時，以EeoRⅠ切割pEC-XK99E質粒為對照，分別對重組質粒用EcoRⅠ單酶切、以（1）選用的雙酶對重組質粒進行雙酶切，然后用電泳技術進行驗證，其實驗結果如圖2所示，若2是對照，則3、4分別是單酶切、雙酶切的結果，做出此推測的依據是 用EcoRⅠ單酶切對照和重組質粒，均使質粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因為3多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同用EcoRⅠ單酶切對照和重組質粒，均使質粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因為3多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同。
（3）將正確的質粒導入A19后，后續的步驟是 目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定。本技術選用微生物大腸桿菌作為受體細胞，而不選用動物細胞，理由是 微生物繁殖速度快，可在短時間內獲得大量基因表達的產物微生物繁殖速度快，可在短時間內獲得大量基因表達的產物（答出一點即可）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】N-1；不能自身成環、不能與引物B互補配對、長度要適中；EcoRⅠ和HindⅠ；磷酸二酯鍵；感受態細胞；用EcoRⅠ單酶切對照和重組質粒，均使質粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因為3多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同；目的基因的檢測與鑒定；微生物繁殖速度快，可在短時間內獲得大量基因表達的產物
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：5難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7