木質(zhì)纖維素是地球上最為豐富的可再生資源。中國科學(xué)家利用基因工程的方法構(gòu)建了嗜熱厭氧桿菌H，以花生殼、玉米芯等為原料發(fā)酵生產(chǎn)生物燃料乙醇，以期提高農(nóng)業(yè)廢棄物的整體利用價值。據(jù)此回答下列問題：
（1）研究者將取樣器放入溫泉底部取樣，利用厭氧技術(shù)將樣品稀釋液接種到以纖維素為

為唯一碳源

為唯一碳源

的選擇培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，加入剛果紅后，出現(xiàn)

透明圈

透明圈

的即為初步篩選所得的降解纖維素的嗜熱厭氧桿菌菌落。
（2）基于嗜熱厭氧桿菌的特殊代謝能力（圖a），研究人員構(gòu)建了雙功能醇醛脫氫酶基因（Adh）的過量表達(dá)載體，圖b為構(gòu)建表達(dá)載體時所需的關(guān)鍵條件。

①為保證雙功能醇醛脫氫酶基因（Adh）能通過雙酶切以正確方向插入質(zhì)粒，需設(shè)計引物1和引物2，其中引物1包含圖b中限制酶

KpnI

KpnI

的識別序列，且該序列位于引物1的

5’端

5’端

（填“5’端”或“3’端”）。
②將重組表達(dá)載體導(dǎo)入嗜熱厭氧桿菌，然后置于含有

紅霉素

紅霉素

的選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，經(jīng)鑒定及擴(kuò)大培養(yǎng)得到工程菌H。
（3）將構(gòu)建的工程菌H進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙醇產(chǎn)量提高，副產(chǎn)物乙酸產(chǎn)量下降。結(jié)合其代謝途徑，分析出現(xiàn)這種結(jié)果的原因

Adb基因過量表達(dá)的Adh酶增多，與P酶競爭結(jié)合乙酰輔酶A

Adb基因過量表達(dá)的Adh酶增多，與P酶競爭結(jié)合乙酰輔酶A

。
（4）嗜熱厭氧桿菌最適生長溫度為55～75℃，產(chǎn)物乙醇在溫度超過50℃即可快速蒸餾出。相對于傳統(tǒng)的發(fā)酵菌株，利用嗜熱厭氧桿菌發(fā)酵產(chǎn)乙醇主要的優(yōu)勢有

①高溫發(fā)酵可殺滅雜菌或抑制雜菌的生長，從而減少發(fā)酵污染；②高溫能夠促進(jìn)乙醇的回收，有利于連續(xù)蒸餾；③嗜熱厭氧菌在大規(guī)模培養(yǎng)時不需要供氧；④高溫環(huán)境下微生物代謝活性及產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率較高。

①高溫發(fā)酵可殺滅雜菌或抑制雜菌的生長，從而減少發(fā)酵污染；②高溫能夠促進(jìn)乙醇的回收，有利于連續(xù)蒸餾；③嗜熱厭氧菌在大規(guī)模培養(yǎng)時不需要供氧；④高溫環(huán)境下微生物代謝活性及產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率較高。

（寫出兩點即可）。