凝乳酶是食品生產中常用的凝結劑，科研人員從動物體內獲得了凝乳酶mRNA，擬利用大腸桿菌通過基因工程生產凝乳酶。據下圖回答下列問題：
（1）利用凝乳酶mRNA，在 逆轉錄逆轉錄酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，進一步通過PCR擴增時需要2種引物，引物的作用是 與模板單鏈結合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）與模板單鏈結合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）。
（2）圖1和圖2是選用的質粒及其幾種相關限制酶的識別位點，在構建基因表達載體時，最好選用的限制酶是 EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠEcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ，這樣選擇的優點是 避免標記基因被破壞、質粒自身環化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質粒正向連接）避免標記基因被破壞、質粒自身環化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質粒正向連接）（答出兩點）。為在凝乳酶基因兩側加上相應的酶切位點，設計引物時需在引物前添加相應酶切位點，PCR過程中至少復制 33次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。
（3）將構建的重組質粒導入大腸桿菌，需要用鈣離子處理，使大腸桿菌處于 感受態感受態。
（4）將在添加了青霉素的培養基中得到的4個大腸桿菌菌落，進行進一步檢測，檢測結果如圖3所示，1～4號菌落需要舍棄的是1號和 2號、3號2號、3號。其中舍棄1號菌落的理由是 目的基因未導入目的基因未導入。
（5）為滿足生產上的需要對凝乳酶進行改良，這種技術屬于 蛋白質蛋白質工程，該工程的改造的對象是 基因基因。
【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．
【答案】逆轉錄；與模板單鏈結合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）；EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ；避免標記基因被破壞、質粒自身環化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質粒正向連接）；3；感受態；2號、3號；目的基因未導入；蛋白質；基因
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：1難度：0.5
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1．回答下列關于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細胞核直徑約1μm,初步推測為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結構有（多選）．
A．細胞膜 B．核糖體 C．擬核 D．莢膜
（2）表中培養液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進行測定，則應選用表中的培養液，針對不選用的其他培養液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長
②具有，會影響對SM01自身產生的酶活力的測定結果
③缺乏，會影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進行測定．
表 試驗用培養液配方培養液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
2．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應用的除草劑，能抑制土壤細菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細菌菌株，并對其計數（如圖所示），以期為修復污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（ ）
發布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環保領域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細菌，并了解其生長規律，進行了如下操作．請回答下列問題：
（1）采樣與細菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細菌：將篩選出的脫硫細菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養基上，待長出菌落后再重復上述步驟，并逐步延長通SO2的時間，同時逐步降低培養基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細菌．
（3）培養與觀察：一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度及培養時間），馴化后的脫硫細菌表現出穩定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細菌的核糖體．
（4）探究生長規律：在計數時，計數方法有稀釋涂布平板法和直接計數法．在用稀釋涂布平板法進行計數時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌，通常推測統計的菌落數往往比活菌的實際數目．發布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5