腸道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白為VP1～VP4，分別由V1～V4基因控制。為研究VP1～VP4的抗原性，從中篩選出EV71的疫苗抗原，研究人員利用基因工程技術生產了上述4種蛋白質。如圖是制備V1基因表達載體的過程示意圖，請回答下列問題：
gus：控制合成的酶使β-葡萄糖苷酸水解為藍色物質
Kan：卡那霉素抗性基因
（1）以RNA為模板，通過4組RT-PCR可分別獲取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR所需要的酶有 逆轉錄酶和Taq酶逆轉錄酶和Taq酶，該過程中子鏈延伸時所需的能量較為特殊，一般來自 dNTPdNTP。
（2）為方便目的基因與質粒的連接，通常將限制酶的切點設計在引物上。引物一般為單鏈DNA，新合成子鏈的延伸方向為5′→3′。PCR獲取V1基因時，10引物中限制酶切點的堿基序列應設計為上游引物3′…GGATCCGGATCC…5′，下游引物3′…CTCGAGCTCGAG…5′。
（3）用相關限制酶處理質粒和V1基因后，再與 DNA連接DNA連接酶混合，加入大腸桿菌溫育。一段時間后，將菌液涂布在含有 β—葡萄糖苷酸β—葡萄糖苷酸和 卡那霉素卡那霉素的平板上，經培養，在平板上長出白色和藍色兩種菌落，其中 白色白色菌落含有V1基因表達載體，判斷依據是 構建目的基因表達載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養基上，含重組V1基因質粒的大腸桿菌不顯藍色構建目的基因表達載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養基上，含重組V1基因質粒的大腸桿菌不顯藍色。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】逆轉錄酶和Taq酶；dNTP；GGATCC；CTCGAG；DNA連接；β—葡萄糖苷酸；卡那霉素；白色；構建目的基因表達載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養基上，含重組V1基因質粒的大腸桿菌不顯藍色
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.6
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術屬于（填“基因工程”或“蛋白質工程”）。可利用定點突變的DNA構建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術，才能最終獲得轉基因植物。
（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程稱為。科研人員通過實驗研究發現培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術可檢測外源基因在小鼠細胞內是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉基因小鼠體細胞進行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7