氨基酸定點突變分析是研究蛋白質的結構和功能、酶催化機理以及對基因表達產物進行定向改造的重要技術。在基因內部引入點突變，是獲得氨基酸定點突變的主要方式。如圖1是利用PCR介導的定點突變技術的原理圖，其中三個引物分別為F1（5'-GGAATTCCATATGAGGATCCTCTTTC-3'）（GAATTC為EcoRⅠ識別位點，并切割G和A之間的磷酸二酯鍵，CATATG為NdeⅠ的識別序列，并切割C和A之間的磷酸二酯鍵）、F2（5'-TGGGACGACTTCGCCTCGACCATGC-3'）（黑體GA為突變堿基）和R2（5'-CCCCCCGGGGGCGGCCAGCCGCTC-3'）（CCCGGG為SmaⅠ的識別序列，并切割C和G之間的磷酸二酯鍵），野生型基因已連接在質粒PIK340上，且序列已知。
（1）第2輪PCR是在第1輪PCR的反應體系中進行的，雖然只加入了F1引物，但仍能得到突變基因的原因是 引物1和含有突變位點的片段可以作為一對引物對野生型基因進行PCR引物1和含有突變位點的片段可以作為一對引物對野生型基因進行PCR，得到的突變基因與pT7Blue質粒連接時需用的酶是 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）
（2）在IPTG和X-gal存在的條件下，Laz基因表達后，產生藍色物質，否則為白色。據圖分析，在固體培養基上添加IPTG和X-gal后，形成的白色菌落不一定是成功導入克隆載體的大腸桿菌，理由是 大腸桿菌細胞內沒有Laz基因大腸桿菌細胞內沒有Laz基因。若要選出成功導入克隆載體的大腸桿菌，還應在培養基中加入 氨芐青霉素氨芐青霉素。
（3）為驗證白色菌落中是否成功導入克隆載體，用EcoRⅠ和SmaⅠ雙酶切提取的DNA進行瓊脂糖凝膠電泳，結果如圖2：
①據圖分析，該突變基因的長度大約為 1.13kb1.13kb。
②為驗證2～8號樣品中是否發生了預期突變，隨機抽取四組進行測序，并與野生型基因進行對比，結果如圖3，該結果說明 2～8號樣品中發生了預期突變2～8號樣品中發生了預期突變。
（4）若該突變基因成功表達，則可獲得氨基酸定點突變的蛋白質，該工程與基因工程的區別是 可以生產自然界中不存在的蛋白質可以生產自然界中不存在的蛋白質。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】引物1和含有突變位點的片段可以作為一對引物對野生型基因進行PCR；T4DNA連接酶；大腸桿菌細胞內沒有Laz基因；氨芐青霉素；1.13kb；2～8號樣品中發生了預期突變；可以生產自然界中不存在的蛋白質
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/19 8:0:9組卷：8引用：3難度：0.6
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2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6