多不飽和脂肪酸（PUFAs）是人體必需脂肪酸，豬肉是我國最主要的肉類消費品，提高其PUFAs含量對居民健康具有重要意義。為解決豬肉中PUFAs含量不足的問題，研究者從線蟲中獲得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育轉fat1基因豬，操作過程如圖1。
（1）利用PCR技術擴增fat1基因時，應在兩種引物的一端分別加上限制酶 EcoRⅠEcoRⅠ和 BamHⅠBamHⅠ識別與切割的序列。為防止酶切產物自身環化，構建表達載體一般選用兩種限制酶，選擇的原則是 B、DB、D。
A.目的基因編碼蛋白質的序列中有兩種限制酶切割位點
B.表達載體內，每種限制酶只有一個切割位點
C.酶切后，目的基因兩端的黏性末端序列相同
D.酶切后，載體形成的兩個黏性末端序列不同
（2）圖1中的連接產物需先導入大腸菌中的原因是 連接產物為混合物，需先導入大腸菌篩選正確的重組表達載體，再導入豬成纖維細胞，以提高轉基因的成功率連接產物為混合物，需先導入大腸菌篩選正確的重組表達載體，再導入豬成纖維細胞，以提高轉基因的成功率；所構建的重組基因表達載體中未標注出的必需元件還有 復制原點和標記基因復制原點和標記基因。
（3）將重組表達載體轉染豬成纖維細胞，另設一組空白對照。48小時后于熒光顯微鏡下觀察到 轉染重組表達載體的豬成纖維細胞有綠色熒光，而空白對照組無綠色熒光轉染重組表達載體的豬成纖維細胞有綠色熒光，而空白對照組無綠色熒光，說明轉染成功。然后以轉基因細胞為核供體構建克隆胚胎，最終獲得轉fat1基因豬。
（4）研究者提取轉基因豬的基因組DNA，利用限制酶DraⅢ將其完全酶切并電泳分離。然后用探針通過 分子雜交分子雜交的方法，檢測fat1基因是否成功整合在豬基因組DNA中，酶切方式及檢測結果如圖2。
①轉基因豬1、2、3中分別被轉入了 1、2、11、2、1個fat1基因。
②請解釋圖2檢測結果中4條雜交帶位置不同的原因：4個fat1基因插入在基因組中的位點不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置4個fat1基因插入在基因組中的位點不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置。
③該實驗 不能不能（填“能”或“不能”）說明成功培育轉基因豬，理由是 沒有檢測fat1基因是否成功表達；沒有在個體生物學水平鑒定轉基因豬的PUFAs沒有檢測fat1基因是否成功表達；沒有在個體生物學水平鑒定轉基因豬的PUFAs。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】EcoRⅠ；BamHⅠ；B、D；連接產物為混合物，需先導入大腸菌篩選正確的重組表達載體，再導入豬成纖維細胞，以提高轉基因的成功率；復制原點和標記基因；轉染重組表達載體的豬成纖維細胞有綠色熒光，而空白對照組無綠色熒光；分子雜交；1、2、1；4個fat1基因插入在基因組中的位點不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置；不能；沒有檢測fat1基因是否成功表達；沒有在個體生物學水平鑒定轉基因豬的PUFAs
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：37引用：2難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6