在轉基因植株培育過程中，通常在利用除草劑抗性基因作為標記基因對轉化細胞進行篩選后，再將該類標記基因刪除是提高轉基因植物生物安全性的重要措施之一。啤酒酵母中的FLP重組酶可以定點刪除位于兩個frt（短特異性靶DNA序列）之間的基因。研究人員將含frt位點的重組T質粒A和含FLP重組酶基因的重組Ti質粒B先后轉入煙草植株，再通過熱誘導處理，最終成功培育出了無綠黃隆（一種除草劑）基因（als）的轉基因耐鹽煙草植株。
回答下列問題：
（1）Ti質粒中的T-DNA的作用是 （T-DNA）可整合到受體細胞的染色體DNA上（T-DNA）可整合到受體細胞的染色體DNA上。
（2）在構建重組T質粒A時，先選擇圖1中的引物 2、32、3對als基因進行PCR擴增，再用 NcoⅠ、PstⅠNcoⅠ、PstⅠ酶同時切割als基因和Ti質粒A（圖2），并利用 DNA連接DNA連接酶連接形成重組Ti質粒A。
（3）提取啤酒酵母的RNA，通過 逆轉錄逆轉錄獲得 cDNAcDNA，再利用PCR擴增出FLP重組酶基因。為便于構建出重組Ti質粒B（圖3），可在FLP重組酶基因PCR引物的 5’端5’端（5'端/3'端）加上BamHI和KpnⅠ酶的識別序列。
（4）通常采用 農桿菌轉化農桿菌轉化法先后將重組Ti質粒A和B轉入煙草細胞中，并在含 潮霉素、綠黃隆潮霉素、綠黃隆的培養基中培養，篩選出含重組Ti質粒A和B的轉化細胞。
（5）相比于普通啟動子，本實驗選擇hsp啟動子的優勢是 可在篩選出轉基因植株后，再通過熱誘導將als基因切除可在篩選出轉基因植株后，再通過熱誘導將als基因切除。
（6）als基因長度約1.7kb,經熱誘導被FLP重組酶成功切除后，其長度變為0.4kb。提取若干經熱誘導處理的轉基因煙草植株的DNA，進行PCR擴增，其電泳檢測結果如圖4所示。圖中 1、31、3（填數字）所對應植株為成功切除als基因的轉基因煙草植株。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】（T-DNA）可整合到受體細胞的染色體DNA上；2、3；NcoⅠ、PstⅠ；DNA連接；逆轉錄；cDNA；5’端；農桿菌轉化；潮霉素、綠黃隆；可在篩選出轉基因植株后，再通過熱誘導將als基因切除；1、3
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：4引用：3難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
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2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6