人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構建及轉染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLC基因為β-乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①的基本原理是先以人乳腺細胞總RNA為模板，通過逆轉錄合成 cDNAcDNA，再通過PCR技術擴增hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因為 hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄（表達）hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄（表達），在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEBL質粒中。
（2）過程③中pEBL質粒經脂質體介導進入山羊乳腺上皮細胞依據的原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（3）將轉染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養液中培養，能夠存活的細胞應該是導入了 pEB質?；騪EBL質粒（或普通質?；蛑亟M質粒）pEB質?；騪EBL質粒（或普通質?；蛑亟M質粒）的細胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞，觀察到 無綠色熒光無綠色熒光現象即為轉染成功的細胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術檢測受體細胞中的染色體DNA上是否插入了hLF基因或檢測 hLF基因是否轉錄出mRNAhLF基因是否轉錄出mRNA，還可以用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術，檢測hLF基因是否翻譯出人乳鐵蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄（表達）；5'；SalⅠ和BamHⅠ；生物膜具有一定的流動性；pEB質粒或pEBL質粒（或普通質粒或重組質粒）；無綠色熒光；hLF基因是否轉錄出mRNA；抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：2難度：0.5
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6