白細胞抗原基因（SLA-2基因）是重要的免疫應答基因。科研人員克隆SLA-2基因，構建該基因的表達載體，進而獲得該基因優勢表達的豬腎上皮細胞。該實驗的主要流程如圖1（已知SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切割位點后的數字表示距復制原點的距離）。其中四種限制酶識別序列和切割位點如表，回答下列問題：
| 限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | Sau3AⅠ |
| 識別序列及切割位點 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
DNA（半保留）復制
DNA（半保留）復制
，為了使擴增的SLA-2基因與質粒連接，需要在引物的 5'
5'
（填3或5）端加上 NotI、XbaI
NotI、XbaI
限制酶識別序列。擴增結束后，常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產物，檢測發現擴增產物中除目的基因外，還有其他不同大小片段的非目的基因，可能的原因一般有以下哪些 ①③
①③
（填序號）。①模板受到污染
②復性溫度過高
③引物太短
④延伸溫度偏低
（2）過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是
擴增重組DNA分子
擴增重組DNA分子
，該過程需要用 Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌，使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態，然后將大腸桿菌涂布在含有 氨芐青霉素
氨芐青霉素
（抗生素）的培養基上培養。（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后進行電泳，依據圖2，在圖2上畫出可能得到的電泳條帶，同時在右側標出DNA片段長度
（4）科研中，一般利用最小致死濃度（使某種細胞全部死亡的最小濃度）的嘌呤霉素溶液處理以初步篩選轉化的豬腎上皮細胞。為確定初步篩選轉化豬腎上皮細胞的最小致死嘌呤霉素濃度，科研人員利用
未轉化的豬腎上皮
未轉化的豬腎上皮
細胞進行相關實驗，結果如圖3。根據實驗結果應使用濃度為 80ug/mL
80ug/mL
的嘌呤霉素溶液初步篩選轉化的豬腎上皮細胞，理由是 80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞（沒有抗嘌呤霉素的細胞）全部死亡的最小濃度，能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞（有抗嘌呤霉素的細胞）
80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞（沒有抗嘌呤霉素的細胞）全部死亡的最小濃度，能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞（有抗嘌呤霉素的細胞）
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA（半保留）復制；5'；NotI、XbaI；①③；擴增重組DNA分子；Ca2+；氨芐青霉素；；未轉化的豬腎上皮；80ug/mL；80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞（沒有抗嘌呤霉素的細胞）全部死亡的最小濃度，能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞（有抗嘌呤霉素的細胞）
；未轉化的豬腎上皮；80ug/mL；80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞（沒有抗嘌呤霉素的細胞）全部死亡的最小濃度，能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞（有抗嘌呤霉素的細胞）【解答】
【點評】
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