現(xiàn)代基因編輯CRISPR/Cas9技術(shù)可以對生物的DNA序列進(jìn)行定點(diǎn)切割。將編碼Cas9酶和sgRNA的基因作為外源基因構(gòu)建基因表達(dá)載體后，導(dǎo)入受體細(xì)胞，可將細(xì)胞內(nèi)某個(gè)基因定向敲除，其作用機(jī)理如圖所示。請回答問題。

（1）sgRNA與Cas9酶是一個(gè)功能復(fù)合體。如圖所示，sgRNA有引導(dǎo)作用，與A基因中部分序列堿基互補(bǔ)配對，Cas9酶在配對區(qū)域定點(diǎn)切割，導(dǎo)致A基因發(fā)生堿基對

缺失

缺失

，基因喪失功能。sgRNA與Cas9酶的聯(lián)合作用類似于

限制

限制

酶的作用。如果要獲得基因敲除動(dòng)物個(gè)體，應(yīng)以

受精卵

受精卵

作為受體細(xì)胞，用

顯微注射

顯微注射

法導(dǎo)入CRISPR/Cas9基因表達(dá)載體。
（2）研究人員擔(dān)心基因編輯發(fā)生“脫靶效應(yīng)”，導(dǎo)致其他非目標(biāo)基因發(fā)生突變，我國科學(xué)家對此進(jìn)行了檢測。在小鼠受精卵分裂為兩個(gè)細(xì)胞時(shí)，向其中一個(gè)細(xì)胞注入基因編輯工具，之后將此胚胎移植入母鼠子宮，待其發(fā)育到14天時(shí)，將胚胎取出，把胚胎的細(xì)胞全部分散開，分成基因編輯細(xì)胞后代和非基因編輯細(xì)胞后代兩個(gè)細(xì)胞群，分別提取DNA，測序、比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas9技術(shù)的脫靶率很低，而另一類單堿基突變系統(tǒng)的基因編輯技術(shù)脫靶率極高。
①用同一受精卵分裂形成的兩個(gè)細(xì)胞作為處理對象和對照，優(yōu)點(diǎn)是

這兩個(gè)細(xì)胞的基因序列相同，避免因?qū)嶒?yàn)組和對照組細(xì)胞原有的基因序列差異掩蓋“脫靶效應(yīng)”

這兩個(gè)細(xì)胞的基因序列相同，避免因?qū)嶒?yàn)組和對照組細(xì)胞原有的基因序列差異掩蓋“脫靶效應(yīng)”

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②利用二細(xì)胞胚胎分裂產(chǎn)生的子細(xì)胞DNA作為測序?qū)ο螅皇菍?shí)驗(yàn)組細(xì)胞和對照組細(xì)胞DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后測序，原因是

PCR擴(kuò)增會(huì)產(chǎn)生較多的復(fù)制錯(cuò)誤，掩蓋“脫靶效應(yīng)”

PCR擴(kuò)增會(huì)產(chǎn)生較多的復(fù)制錯(cuò)誤，掩蓋“脫靶效應(yīng)”

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③為方便將基因編輯細(xì)胞后代和非基因編輯細(xì)胞后代分開，可在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)

利用某種熒光蛋白基因作為標(biāo)記基因

利用某種熒光蛋白基因作為標(biāo)記基因

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（3）基因編輯的“脫靶效應(yīng)”可能對被編輯個(gè)體帶來什么不良影響？

如果脫靶效應(yīng)發(fā)生在原癌基因，可能導(dǎo)致細(xì)胞癌變

如果脫靶效應(yīng)發(fā)生在原癌基因，可能導(dǎo)致細(xì)胞癌變

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