蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響．我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥，做了相關研究．
（1）研究者用相同的

限制酶和DNA連接

限制酶和DNA連接

酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于經

CaCl₂

CaCl₂

處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌．
（2）檢測發現，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因．
①這是一種定點的

基因突變

基因突變

技術．
②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請填寫以下表格（若選用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）．

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1	√ √	√ √	× ×	× ×
PCR2	× ×	× ×	√ √	√ √
PCR3	× ×	× ×	× ×	× ×
PCR4	√ √	× ×	× ×	√ √

（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和

含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）

含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）

分別導入大腸桿菌，提取培養液中的蛋白質，用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高．為檢測表達產物的生物活性，研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養基上，培養一段時間后，比較

抑菌圈

抑菌圈

的大小，以確定表達產物的生物活性大小．
（4）作為微生物農藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優點是

對人、畜、農作物和自然環境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高

對人、畜、農作物和自然環境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高

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