回答下列（一）、（二）小題：
（一）活性染料應(yīng)用廣泛，但其產(chǎn)生的廢水含鹽量高、有機(jī)質(zhì)高、色度高，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重。研究小組利用活性黃色染料篩選能降解活性染料的微生物菌種，以用于水體污染治理。
（1）采樣：在

活性染料廠

活性染料廠

附近采集活性污泥，加入適量的

鹽溶液

鹽溶液

，通入氧氣，促進(jìn)微生物的以備使用。
（2）菌種篩選：取活性染料配置成500mg/L的培養(yǎng)基分裝于5個(gè)錐形瓶，經(jīng)

高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌

后分別加入1ml的含菌種的污泥，置于

恒溫培養(yǎng)箱

恒溫培養(yǎng)箱

中培養(yǎng)一段時(shí)間后，選擇

較渾濁

較渾濁

的錐形瓶中的微生物進(jìn)一步分離提純。
（3）純種分離：配置相應(yīng)濃度的活性染料固體培養(yǎng)基后，若要操作簡(jiǎn)便，可利用

劃線分離

劃線分離

法篩選得到純的菌種。
（4）菌種保存：分離得到的菌種可接種到

斜面

斜面

培養(yǎng)基，置于4℃冰箱保存。
（二）2018年非洲豬瘟病毒傳至我國(guó)并對(duì)養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成嚴(yán)重威脅，該病毒是一種雙鏈DNA病毒，可編碼多種蛋白質(zhì)。非洲豬瘟病毒表面的主要結(jié)構(gòu)蛋白p22蛋白，可以誘導(dǎo)豬產(chǎn)生抗體。工業(yè)上可利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)p22蛋白疫苗，并制備相應(yīng)的單克隆抗體。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：
（1）p22蛋白疫苗的制備和鑒定。與p22蛋白基因及質(zhì)粒有關(guān)的限制酶切位點(diǎn)如圖所示，已知不同種限制酶切割出的黏性末端不同。

（LacZ基因能表達(dá)出β-半乳糖苷酶，使無(wú)色的半乳糖苷分解，進(jìn)而使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色）
①根據(jù)p22蛋白基因的序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物，通過(guò)

PCR

PCR

技術(shù)擴(kuò)增特定的DNA以獲取目的基因；②構(gòu)建重組DNA，利用

HindⅢ和Bam HⅠ

HindⅢ和Bam HⅠ

酶（寫(xiě)出酶的名稱(chēng)）分別切割目的基因和質(zhì)粒，以減少連接產(chǎn)物的種類(lèi)并避免目的基因與質(zhì)粒反向連接；③用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，并將受體細(xì)胞涂布在含氨芐青霉素的LB固體平板上，在37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h,挑取

白色

白色

的單菌落，將其轉(zhuǎn)移至液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)。一段時(shí)間后離心收集細(xì)胞，超聲破碎后離心取上清液制備樣品，利用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

的方法對(duì)p22蛋白進(jìn)行鑒定。
（2）抗p22蛋白的單克隆抗體制備及鑒定。p22蛋白可作為

抗原

抗原

對(duì)小鼠進(jìn)行多次注射后，分離出小鼠脾細(xì)胞，利用

滅活

滅活

的仙臺(tái)病毒促進(jìn)該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞融合；融合細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次篩選后得到的雜交瘤細(xì)胞具有的特點(diǎn)是

既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生大量抗體

既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生大量抗體

；將選出的雜交瘤細(xì)胞接種至小鼠腹腔，待小鼠腹部膨脹明顯，采集

腹水

腹水

，分離提取出單克隆抗體。