安莎霉素是一類主要由海洋來源的稀有放線菌產生的活性大環內酰胺類次級代謝產物，具有較高的抗菌活性和藥用價值。科研人員通常從深海采集淤泥樣本，再分離、純化并篩選出產安莎霉素的放線菌。一株海洋來源的稀有放線菌的分離培養流程如圖1所示。請分析回答下列問題：
（1）過程①的接種方法為 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法。
（2）統計菌落種類和數量時要每隔24 h觀察統計一次，直到各類菌落數目穩定，以防止培養時間不足導致 遺漏菌落的種類和數目遺漏菌落的種類和數目，或培養時間太長導致 菌落粘連影響計數、培養基表面干燥脫水菌落粘連影響計數、培養基表面干燥脫水。
（3）研究人員發現產安莎霉素的放線菌具有一個普遍的共性--氨基酸缺陷型，從培養基成分分析，基本培養基與完全培養基存在差異的成分是 氨基酸氨基酸。為了初步鑒定營養缺陷型放線菌菌株，科研人員進行了如下操作：
①用接種針挑取 菌落A菌落A（填“菌落A”或“菌落B”）接種于盛有完全液體培養基的離心管中，28℃振蕩培養3～5天后，離心取沉淀物，用無菌水洗滌3次制成菌懸液。
②吸取1 mL菌懸液加入無菌培養皿中，傾注15 mL融化并冷卻至50℃左右的基本培養基，待其冷凝后用記號筆在 皿底皿底（“皿蓋”或“皿底”）劃分五個區域，標記A、B、C、D、E。
③在劃分的五個區域上放入少量分組的氨基酸粉末（如表所示），經培養后，觀察生長圈出現的區域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。
| 組別 | 所含氨基酸 | ||||
| A | 組氨酸 | 蘇氨酸 | 谷氨酸 | 天冬氨酸 | 亮氨酸 |
| B | 精氨酸 | 蘇氨酸 | 賴氨酸 | 甲硫氨酸 | 苯丙氨酸 |
| C | 酪氨酸 | 谷氨酸 | 賴氨酸 | 色氨酸 | 丙氨酸 |
| D | 甘氨酸 | 天冬氨酸 | 甲硫氨酸 | 色氨酸 | 絲氨酸 |
| E | 半胱氨酸 | 亮氨酸 | 苯丙氨酸 | 丙氨酸 | 絲氨酸 |
天冬氨酸
天冬氨酸
缺陷型。（4）科研人員分離、純化出產安莎霉素的放線菌后，需要利用PCR技術大量擴增其染色體上的16S rRNA保守片段，然后通過DNA序列比對進行菌種親源關系的鑒定。
①查找數據庫發現該放線菌的16S rRNA目的基因片段及相應限制酶識別序列如圖2所示：
16S rRNA基因片段
| 限制酶 | EcoR I | BamH I | HindⅢ | Sac I |
| 識別序列和切割位點 | GAATTCG | GATCC | AAGCTT | GAGCTC |
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 SacⅠ
SacⅠ
。得到目的基因以后就可以利用PCR技術對16S rRNA進行體外擴增，此過程需要加入 Taq酶
Taq酶
催化。②聚合酶鏈式反應對引物的特異性要求較高，放線菌是一類GC含量高的細菌，設定退火溫度時需要適當
升高
升高
（填“升高”或“降低”）溫度，為了摸索出最適退火溫度，設定了55℃、56℃、57℃、58℃四個溫度梯度，反應結束后，電泳檢測PCR產物（已知16S rRNA片段大小為1 500 dp），不同溫度對應的結果如圖3所示，1～4四個泳道分別對應的退火溫度是 A
A
（填字母）。A.55℃、56℃、57℃、58℃
B.56℃、55℃、58℃、57℃
C.58℃、57℃、56℃、55℃
D.55℃、58℃、56℃、57℃
【答案】稀釋涂布平板法；遺漏菌落的種類和數目；菌落粘連影響計數、培養基表面干燥脫水；氨基酸；菌落A；皿底；天冬氨酸；EcoRⅠ；SacⅠ；Taq酶；升高；A
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：30引用：1難度：0.7
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1．回答下列關于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細胞核直徑約1μm,初步推測為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結構有（多選）．
A．細胞膜 B．核糖體 C．擬核 D．莢膜
（2）表中培養液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進行測定，則應選用表中的培養液，針對不選用的其他培養液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長
②具有，會影響對SM01自身產生的酶活力的測定結果
③缺乏，會影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進行測定．
表 試驗用培養液配方培養液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
2．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應用的除草劑，能抑制土壤細菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細菌菌株，并對其計數（如圖所示），以期為修復污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（ ）
發布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環保領域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細菌，并了解其生長規律，進行了如下操作．請回答下列問題：
（1）采樣與細菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細菌：將篩選出的脫硫細菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養基上，待長出菌落后再重復上述步驟，并逐步延長通SO2的時間，同時逐步降低培養基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細菌．
（3）培養與觀察：一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度及培養時間），馴化后的脫硫細菌表現出穩定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細菌的核糖體．
（4）探究生長規律：在計數時，計數方法有稀釋涂布平板法和直接計數法．在用稀釋涂布平板法進行計數時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌，通常推測統計的菌落數往往比活菌的實際數目．發布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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