大腸桿菌zntA基因和zntB基因編碼的Zn2+轉運蛋白A和B能將Zn2+排出細胞外，維持細胞內Zn2+穩態。科研人員嘗試通過同源重組技術獲得zntA和zntB基因被敲除的突變株。如圖1是敲除zntA基因的主要流程，其中T3-KmR質粒中的P1-KmR-P2是指KmR（卡那霉素抗性基因）兩側帶有兩個通用引物位點P1和P2，AmPr代表氨芐青霉素抗性基因。zntA基因兩側同源臂H1和H2的序列已標注，請回答
（1）T3-KmR質粒中組成ori（復制原點）的基本單位是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸。除引物1和引物2之外PCR反應體系中還需要加入 熱穩定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸、模板鏈熱穩定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸、模板鏈等物質。
（2）下列引物中的 aa、bb（填字母）可作為引物1和引物2，其下劃線序列設計的依據是 P1和P2P1和P2。
a5’ATGTCGACTCCTGACAATCACGGCAAGAAAGCCCCTTGT3’
b5’TTATCTCCTGCGCAACAATCTTAACGCACTCGCTGTCGTAT3’
c5’TACAGCTGAGGACTGTTAGTGCCGTTCTTTCGCGGGTGTG3’
d5’AATAGAGGACGCGTTGTTAGAATTGCGTAAGCTACTCCAA3’
（3）將同源重組替換片段導入經過 鈣離子鈣離子處理過的感受態細胞中。然后將轉化后的菌涂布在含有 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養基上培養，以篩選發生了同源重組的大腸桿菌。
（4）科研人員初步篩選獲得zntA基因敲除菌株KZA07、zntA和zntB基因均被敲除菌株KZAB04，并采用梯度稀釋平板點樣實驗比較它們對不同濃度Zn2+的耐受力，其生長的菌落結果如圖2；
①對照組應該選擇 znt A和znt B基因沒有被敲除的znt A和znt B基因沒有被敲除的菌株，高濃度Zn2+培養條件下b組和c組菌株長勢不同的原因是 b組還有znt B基因編碼的Zn2+轉運蛋白B能將Zn2+排出細胞外，維持細胞內Zn2+穩態b組還有znt B基因編碼的Zn2+轉運蛋白B能將Zn2+排出細胞外，維持細胞內Zn2+穩態（2分）。
②在此基礎上，科學家進行了Zn2+功能互補實驗：將CzcD（已經被鑒定的具有Zn2+外排功能的蛋白質）基因分別導入a、b、c三組菌株中，得到a1、b1、c1三組菌株，請預期在高濃度Zn2+培養條件下的實驗結果：a1組與a組菌株長勢無明顯差異，b1組長勢比b組好，c1組長勢顯著比c組好b1組長勢比b組好，c1組長勢顯著比c組好。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸；熱穩定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸、模板鏈；a；b；P1和P2；鈣離子；氨芐青霉素；znt A和znt B基因沒有被敲除的；b組還有znt B基因編碼的Zn2+轉運蛋白B能將Zn2+排出細胞外，維持細胞內Zn2+穩態；b1組長勢比b組好，c1組長勢顯著比c組好
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：2難度：0.5
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6