研究人員將大麥細胞的LTP1基因導入啤酒酵母菌中，獲得的啤酒酵母菌可產生LTP1蛋白，并釀出泡沫豐富的啤酒，下圖為轉基因啤酒酵母的生產過程。回答下列問題：
（1）已知DNA復制時子鏈的延伸方向是5′→3′，圖1中A、B、C、D在不同情況下可以作為引物，在PCR技術中，擴增LTP1基因，必須要有 有一段已知目的基因的核苷酸序列有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成引物。擴增LTP1基因時應該選用圖1中的 B和CB和C作為引物。
（2）基因表達載體的構建基因表達載體的構建是實施基因工程的核心。圖2中的B為質粒，質粒和LTP1基因結合形成重組質粒C。重組質粒C在受體細胞中能夠穩定存在并發揮作用，在LTP1基因的首端必須具有 啟動子啟動子，尾端必須具有終止子，還必須含有標記基因和目的基因。
（3）為檢測目的基因在受體細胞基因組中的整合情況，首先采用分子雜交技術檢測LTP1基因是否導入成功，需要從轉基因啤酒酵母中提取DNA，用 放射性同位素標記的目的基因（LTPI基因）單鏈放射性同位素標記的目的基因（LTPI基因）單鏈作探針與之雜交。還可分別用含有青霉素、四環素的兩種選擇培養基進行篩選，則有圖2中C導入的酵母菌在選擇培養基上的生長情況是 在含有青霉素的培養基上存活，但不能在含有四環素的培養基上存活在含有青霉素的培養基上存活，但不能在含有四環素的培養基上存活。
（4）為檢測轉基因啤酒酵母是否產生LTP1蛋白，除檢測LTP1蛋白是否產生及含量外，還可觀察轉基因啤酒酵母所釀啤酒的 泡沫豐富程度泡沫豐富程度進行判斷，若能檢測到LTP1蛋白，但效果差，可能的原因是 LTPI基因表達效率低，合成的LTPI蛋白少LTPI基因表達效率低，合成的LTPI蛋白少；若經檢測確定細胞中無LTP1蛋白，可采用PCR技術檢測細胞中的RNA，如果能檢測到mRNA，則可能是 （LTPI基因）未能正常翻譯（LTPI基因）未能正常翻譯；如果檢測后確定細胞中無LTP1蛋白的mRNA，但之前能檢測到LTP1基因，則LTP1基因未能正常轉錄的原因可能是 LTPI基因反向插入質粒DNA分子中LTPI基因反向插入質粒DNA分子中。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】有一段已知目的基因的核苷酸序列；B和C；基因表達載體的構建；啟動子；放射性同位素標記的目的基因（LTPI基因）單鏈；在含有青霉素的培養基上存活，但不能在含有四環素的培養基上存活；泡沫豐富程度；LTPI基因表達效率低，合成的LTPI蛋白少；（LTPI基因）未能正常翻譯；LTPI基因反向插入質粒DNA分子中
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：14引用：2難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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