細胞核定位信號（NLS）能夠促進蛋白定位于細胞核中，科研人員通過基因工程技術，將NLS基因與綠色熒光蛋白（GFP）基因融合，插入植物雙元表達載體pRI101中，獲得一個新的pRI101-NLS-GFP植物表達載體，該載體有望在病原菌蛋白細胞生物學功能研究中得到廣泛應用。請結合實驗流程回答下列問題：
（1）若已知NLS基因的脫氧核苷酸序列，則可采用 人工合成人工合成法獲得該目的基因。該方法在獲取目的基因時 不需要不需要（填“需要”或“不需要”）模板。
（2）在構建NLS-GFP融合基因時，需在設計引物 5’端5’端時添加同源序列。將添加同源序列的GFP與NLS融合，用特定的DNA酶處理，形成黏性末端，然后降溫以促進 黏性末端堿基配對黏性末端堿基配對形成NLS-GFP融合基因。
（3）為獲得融合熒光蛋白，設計P4時不能包含終止密碼子的編碼序列，否則將導致 綠色熒光蛋白（GFP）不含有NLS定位信號綠色熒光蛋白（GFP）不含有NLS定位信號。
（4）過程④在構建基因表達載體時，應選擇 NdeⅠ、SmaⅠNdeⅠ、SmaⅠ酶連接。將重組質粒導入大腸桿菌時需要用氯化鈣處理，其目的 使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態。
（5）在受體細胞中，NLS被相應蛋白質識別后通過 核孔核孔進入 細胞核細胞核，所以可觀察到綠色熒光主要漿集在此處。為了更具科學性，應向對照組的受體細胞中導入 不含融合基因雙元表達載體pRⅠ101不含融合基因雙元表達載體pRⅠ101質粒。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】人工合成；不需要；5’端；黏性末端堿基配對；綠色熒光蛋白（GFP）不含有NLS定位信號；NdeⅠ、SmaⅠ；使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態；核孔；細胞核；不含融合基因雙元表達載體pRⅠ101
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/4 8:0:9組卷：5引用：2難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6