自然界中的兩種微生物，可以通過各自不同的作用將培養(yǎng)液中的葡萄糖轉(zhuǎn)化為維生素C，其過程如圖所示．在歐文氏菌中無2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶（2，5-DKG還原酶），不能將2，5-二酮基-D-葡萄糖酸轉(zhuǎn)化為2-二酮基-L-古龍酸；而棒狀桿菌不能直接轉(zhuǎn)化D-葡萄糖．通過基因工程技術(shù)，可以改造某種細(xì)菌，僅用一步發(fā)酵即可生成2-二酮基-L-古龍酸．請根據(jù)以上信息回答下列問題．

（1）利用基因工程技術(shù)可以改造上述兩種菌中的

歐文氏

歐文氏

菌，使其可直接利用D-葡萄糖生成2-二酮基-L-古龍酸．
（2）利用基因工程技術(shù)改造此細(xì)菌的基本方法是：先用

同種限制性核酸內(nèi)切酶

同種限制性核酸內(nèi)切酶

同時切割

2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶基因

2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶基因

和

質(zhì)粒

質(zhì)粒

，然后用DNA連接酶將上述切割產(chǎn)物連接，構(gòu)成

重組質(zhì)粒

重組質(zhì)粒

并將其導(dǎo)入到受體菌中．
（3）在獲得轉(zhuǎn)基因工程菌后，培養(yǎng)“工程菌”的培養(yǎng)基應(yīng)含有

碳源、氮源、水、無機(jī)鹽、生長因子

碳源、氮源、水、無機(jī)鹽、生長因子

等幾類營養(yǎng)物質(zhì)．欲純化此工程菌，可以采用

劃線

劃線

法將菌種接種在

固體

固體

培養(yǎng)基上，以獲得

單個

單個

菌落；進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和獲得產(chǎn)品時，應(yīng)選用

液體

液體

培養(yǎng)基．