下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	HindSⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
識別序列及切割位點	G↓GATCC CCTAG↓G	A↓AGCTT TTCGA↓A	G↓AATTC CTTAA↓G	CCC↓GGG GGG↓CCC

（1）EcoRI斷開的是

鳥嘌呤脫氧核苷酸

鳥嘌呤脫氧核苷酸

和 

腺嘌呤脫氧核苷酸

腺嘌呤脫氧核苷酸

 之間的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

鍵。一個圖1所示的質粒分子經SmaⅠ切割前后，分別含有

0，2

0，2

 個游離的磷酸基團。
（2）若對圖中質粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質粒的熱穩定性越

高

高

。
（3）用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是

會破壞質粒中的標記基因和外源DNA中的目的基因

會破壞質粒中的標記基因和外源DNA中的目的基因

。
（4）與只使用EcoR I相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優點在于可以實現

目的基因和質粒的定向連接

目的基因和質粒的定向連接

。BamHⅠ切割DNA后形成的是

黏性

黏性

末端，寫出該末端

-CTAG或GATC-

-CTAG或GATC-

。
（5）重組質粒中抗生素抗性基因的作用是為了

鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞

鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞

。如果是四環素抗性基因，可以在培養基中加

四環素

四環素

來幫助實現該作用。
（6）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在

四環素

四環素

的培養基中培養，以完成目的基因表達的初步檢測。