大芻草具有較強的耐鹽堿能力，該性狀與M蛋白有關。科學家通過PCR技術獲取和擴增M蛋白基因（如圖1）。將獲得的大量M蛋白基因與質粒構建基因表達載體，各部分結構如圖2所示。
（1）PCR一般可分為變性、復性、延伸變性、復性、延伸三步。據圖1分析，PCR過程應選擇的引物是 Ⅱ、ⅢⅡ、Ⅲ，引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。
（2）在M蛋白基因兩端設計不同黏性末端的目的是 防止M蛋白基因自身環化，保證M蛋白基因在質粒上正向連接防止M蛋白基因自身環化，保證M蛋白基因在質粒上正向連接。質粒中氨芐青霉素抗性基因的作用是 便于重組DNA分子的篩選便于重組DNA分子的篩選。
（3）為實現質粒和M蛋白基因的高效連接，切割質粒時選用限制酶XmaⅠ而不選用限制酶SmaⅠ的原因是 XmaⅠ酶切出的黏性末端與M蛋白基因黏性末端相同，SmaⅠ的酶切末端為平末端，無法與M蛋白基因的黏性末端連接XmaⅠ酶切出的黏性末端與M蛋白基因黏性末端相同，SmaⅠ的酶切末端為平末端，無法與M蛋白基因的黏性末端連接。為將M蛋白基因連接到質粒上，還需要等酶 BglⅡ、DNA連接酶BglⅡ、DNA連接酶。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】變性、復性、延伸；Ⅱ、Ⅲ；使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸；防止M蛋白基因自身環化，保證M蛋白基因在質粒上正向連接；便于重組DNA分子的篩選；XmaⅠ酶切出的黏性末端與M蛋白基因黏性末端相同，SmaⅠ的酶切末端為平末端，無法與M蛋白基因的黏性末端連接；BglⅡ、DNA連接酶
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：1難度：0.4
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