研究發現，大部分白血病患者細胞中存在異常的融合基因UBA2-WTIP，可作為檢測白血病的特異性分子標志物。科研人員通過RT-PCR方法克隆得到融合基因UBA2-WTIP，為了研究該基因的作用和致病機制，需要構建重組載體并把目的基因和FLAG標簽基因序列連接起來，分別獲得帶有FLAG肽鏈的UBA2-WTIP融合蛋白和WTIP蛋白。FLAG肽鏈由8個氨基酸殘基組成，可作為基因工程中蛋白質是否表達的標記。
（1）科研人員以提取的某白血病人外周血細胞總RNA為模板，經過

逆（反）轉錄

逆（反）轉錄

過程合成cDNA，設計

2

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種引物，經RT-PCR擴增出融合基因UBA2-WTIP.對測序結果進行數據分析，推測融合基因UBA2-WTIP是在UBA2基因的第16外顯子與WTIP基因的第2外顯子處拼接而成，如圖1所示。為了驗證該融合基因的產生是基因組DNA融合而不是不同的RNA剪接后逆轉錄所產生的，可通過PCR驗證，其實驗思路和預期結果為

提取該病人的DNA，使用圖中F₁和R₁引物進行PCR擴增，若出現239bp擴增片段，該融合基因的融合方式是基因組水平融合

提取該病人的DNA，使用圖中F₁和R₁引物進行PCR擴增，若出現239bp擴增片段，該融合基因的融合方式是基因組水平融合

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（2）為了構建重組載體，科研人員設計了以下2種引物，如圖2所示：
上游引物F：為：5'TATGGTACCATG①GCACTGTCGCGGGG3'，GGTACC為KpnⅠ酶切位點；
下游引物R為：5'TAT②TCA③GAGCTCAGTGACGTG3'；
FLAG標簽基因編碼鏈序列（5'GATTACAAGGATGACGACGATAAG3'）可以插入目的基因編碼區的首端或者末端。已知引物中ATG對應起始密碼。若UBA2-WTIP融合基因編碼的蛋白質前端有一段信號肽，則FLAG標簽基因序列一般不能插入①位置，原因是

蛋白質前端的信號肽一般會在蛋白質成熟時被切割掉，所以不能得到帶有FLAG肽鏈的蛋白質

蛋白質前端的信號肽一般會在蛋白質成熟時被切割掉，所以不能得到帶有FLAG肽鏈的蛋白質

；若在下游引物R₂②③處插入FLAG標簽基因序列和EcoR1酶切位點，已知引物中TCA對應終止密碼，位置③處序列為5'

CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC

CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC

3'。
（3）制備的重組載體體外轉染人類白血病細胞株KG-la細胞，提取各組細胞總蛋白，用FLAG單克隆抗體檢測蛋白表達情況，并分別測定轉染空質粒的對照細胞、轉錄UBA2-WTIP融合基因及轉錄WTIP基因的KGla細胞增殖情況，結果分別如圖3所示。
檢測相關蛋白質是否表達的方法是

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

；上述生長曲線結果說明

UBA2-WTIP融合基因能在體外促進白血病細胞增殖，WTIP基因能抑制白血病細胞的增殖

UBA2-WTIP融合基因能在體外促進白血病細胞增殖，WTIP基因能抑制白血病細胞的增殖

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