β-丙氨酸不僅是一種醫(yī)藥中間體，還可以作為食品添加劑，改善食物味道，提高產(chǎn)品質(zhì)量。可運用構(gòu)建L-天冬氨酸α-脫羧酶大腸桿菌的方式生產(chǎn)該氨基酸，制備工程菌的示意圖如圖所示，回答下列問題：

（1）構(gòu)建工程菌主要需要四個步驟：

目的基因的獲取

目的基因的獲取

→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

→目的基因的檢測與鑒定。
（2）構(gòu)建成功的C除含有目的基因外，還應(yīng)含有

啟動子、終止子、標(biāo)記基因

啟動子、終止子、標(biāo)記基因

（答出三點即可）。該過程分別對質(zhì)粒和含目的基因的片段進行雙酶切，雙酶切的優(yōu)點是

防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接

防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接

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（3）為了確定工程菌中的L-天冬氨酸α-脫羧酶基因是否轉(zhuǎn)錄，可用同位素或熒光標(biāo)記的

L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈

L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈

作探針進行分子雜交檢測。
（4）若要通過基因工程的方法探究L-天冬氨酸α-脫羧酶基因能否在酵母菌中表達(dá)，實驗思路是

將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌，檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量

將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌，檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量

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