圖示PIJ702是一種常用質粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。
表1

pU702pZHZ8

BglI5.7kb6.7kb

表2

固體培養基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL）	0	1	2	5	10
不含質粒的鏈霉菌生長狀況	+++++	+++	+	-	-

+表示生長；-表示不生長。
（1）限制性核酸內切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

斷裂，切割形成的末端有

黏性末端和平末端

黏性末端和平末端

兩種。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構建重組質粒pZHZ8。上述兩種質粒經限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為

1.4

1.4

kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是

pIJ702上的原有BglII位點被目的基因置換得到的環狀pZHZ8，仍能被BglII切割成一條線段

pIJ702上的原有BglII位點被目的基因置換得到的環狀pZHZ8，仍能被BglII切割成一條線段

。
（3）導入目的基因時，首先用Ca²⁺處理鏈霉菌使其成為感受態細胞，再將重組質粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成

轉化

轉化

過程。
（4）不含質粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在

5

5

μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是

根據導入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選

根據導入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選

。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的

RNA

RNA

（填“DNA”或“RNA”），檢測方法應采用

分子雜交

分子雜交

技術。