新冠病毒處于不斷的變異中，為了增強疫苗接種的有效性，科研人員擬將新冠病毒的S、N及E蛋白的主要抗原信息片段串聯成融合蛋白作為疫苗的有效成分，如圖為其研發思路。圖中①-⑤表示過程，表中為四種限制酶的識別序列。
| 限制酶 | NcoⅠ | SphⅠ | BamHⅠ | NheⅠ |
| 識別序列和切割位點 | C↓CATGG | GCATG↓C | G↓CTAGC | G↓GATCC |
cDNA
cDNA
序列，利用化學合成的方法得到目的基因，即融合基因，再使用 PCR
PCR
技術擴增該基因。（2）圖中①過程為
構建基因表達載體
構建基因表達載體
，需先使用限制酶 NcoⅠ和NheⅠ
NcoⅠ和NheⅠ
切割質粒pET-28a,相較于用同一種限制酶切，用兩種限制酶切的優點是 防止目的基因自身環化，防止目的基因與質粒反向連接
防止目的基因自身環化，防止目的基因與質粒反向連接
。（3）步驟②中用Ca2+處理大腸桿菌，然后將轉化后的菌液涂布于含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養基上，該培養基長出的菌落 是
是
（選填“是”或“不是”或“不一定是”）導入了重組質粒的大腸桿菌。（4）可利用
抗原抗體雜交
抗原抗體雜交
法檢測該融合蛋白基因是否轉錄。（5）利用大腸桿菌表達融合蛋白，可實現大規模、高產量制備，但缺點是需要對獲得的蛋白質進行體外加工，從細胞結構和功能角度分析，原因是大腸桿菌
是原核生物，無細胞器對蛋白質進行加工
是原核生物，無細胞器對蛋白質進行加工
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；PCR；構建基因表達載體；NcoⅠ和NheⅠ；防止目的基因自身環化，防止目的基因與質粒反向連接；氨芐青霉素；是；抗原抗體雜交；是原核生物，無細胞器對蛋白質進行加工
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.5
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