1965年中國科學家人工合成了具有生物活性的結晶牛胰島素，摘取了人工合成蛋白質的桂冠，人胰島素基因表達的最初產物是一條肽鏈構成的前胰島素原，經圖1所示的過程形成具生物活性的胰島素。此后科學家又提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產人胰島素的兩種方法：AB法是根據胰島素AB兩條肽鏈的氨基酸序列人工合成兩種DNA片段，利用工程菌分別合成兩條肽鏈后將其混合自然形成胰島素；BCA法是利用胰島B細胞中的mRNA得到胰島素基因，表達出胰島素原后再用特定酶切掉C肽段。這兩種方法使用同一種質粒作為載體。請分析并回答下列問題：
（1）在人體胰島B細胞內，圖1中前胰島素原形成具生物活性的胰島素過程中參與的細胞器有 內質網、高爾基體和線粒體內質網、高爾基體和線粒體。
（2）由于密碼子具有 簡并性簡并性，AB法中人工合成的兩種DNA片段均有多種可能的序列。 AB和BCAAB和BCA（填“AB”“BCA”或“AB和BCA”）法獲取的目的基因中不含人胰島素基因啟動子。
（3）圖2是利用基因工程生產人胰島素過程中使用的質粒及目的基因的部分結構。為使目的基因與載體正確連接，在設計PCR引物時，在胰島素基因兩端可添加限制酶 XhoⅠ和MunⅠXhoⅠ和MunⅠ的識別序列。
（4）對重組表達載體進行酶切鑒定，若選擇限制酶SalⅠ，假設所有對應切割位點均能切割，則溶液中最多能獲得 77種大小不同的DNA片段。
（5）β-半乳糖苷酶可以分解無色的X-gal產生藍色物質使菌落呈現藍色，否則菌落為白色。經Ca2+處理的大腸桿菌與重組質粒混合培養一段時間后，采用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法將大腸桿菌接種到添加了 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal的培養基上篩選出 白白色的菌落即為工程菌種。
（6）科學家利用蛋白質工程技術，研制出了賴脯胰島素，與天然胰島素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。獲得賴脯胰島素基因的途徑是：從預期的蛋白質功能出發→設計預期的蛋白質結構設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】內質網、高爾基體和線粒體；簡并性；AB和BCA；XhoⅠ和MunⅠ；7；稀釋涂布平板；氨芐青霉素和X-gal；白；設計預期的蛋白質結構
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/7 8:0:9組卷：1引用：2難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6