心臟移植是挽救終末期心臟病患者生命唯一有效的手段，然而心臟移植過程中會發生缺血再灌注損傷（IRI），可能導致心臟壞死。研究發現，IRI通過促進Caspase8等一系列凋亡基因的表達，導致細胞凋亡壞死最終引起器官損傷。根據Caspase8基因合成的小干擾RNA（siRNA）可以使Caspase8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官損傷。如圖1是利用豬的心肌細胞開展siRNA作用研究的示意圖。回答下列問題：
（1）圖1中步驟②構建重組質粒需要使用 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶等工具酶。與直接將siRNA導入豬的心肌細胞相比，通過重組質粒將siRNA對應的DNA序列導入心肌細胞，其優點是 可持續產生siRNA，使靶基因長時間沉默可持續產生siRNA，使靶基因長時間沉默（答出一點）。
（2）siRNA對應DNA序列在心肌細胞中表達產生的siRNA，與RISC組裝形成基因沉默復合物，通過抑制基因表達的 翻譯翻譯過程，使Caspase8基因沉默，從而降低IRI引起的細胞凋亡。
（3）研究人員根據Caspase8基因的堿基序列，設計了三種序列分別導入豬的心肌細胞，通過測定靶基因Caspase8的mRNA含量來確定最優序列。測定mRNA含量時，需提取心肌細胞的總RNA，經過 逆轉錄逆轉錄過程得到cDNA，再進行PCR擴增，測定PCR產物量，結果如圖2所示。據此判斷最優序列是 序列2序列2。
（4）選用豬的心肌細胞做受體細胞是因為豬在基因、解剖結構、生理生化和免疫反應等方面與人類極為相似。為了解決心臟移植供體短缺問題，許多科學家正在研究用豬心臟代替人的心臟。你認為將豬心臟移植到人體面臨的最大挑戰是免疫排斥反應，這是因為免疫系統會把外來器官當作抗原（“非己”）成分進行攻擊。請說出一種解決這一問題的思路：可以利用基因工程技術將免疫排斥有關豬的抗原基因敲除或轉入一些人類特有蛋白的基因，將豬細胞偽裝成人的細胞可以利用基因工程技術將免疫排斥有關豬的抗原基因敲除或轉入一些人類特有蛋白的基因，將豬細胞偽裝成人的細胞（利用基因工程的方法）。
【答案】限制酶、DNA連接酶；可持續產生siRNA，使靶基因長時間沉默；翻譯；逆轉錄；序列2；可以利用基因工程技術將免疫排斥有關豬的抗原基因敲除或轉入一些人類特有蛋白的基因，將豬細胞偽裝成人的細胞
【解答】
【點評】
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發布：2024/5/6 8:0:9組卷：12引用：3難度：0.5
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1．學習以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進行無義突變遺傳病的治療
無義突變是由于某個堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變為終止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質的功能改變，引發相關疾病。約有10%～15%的人類基因相關遺傳疾病是由無義突變引發的。常規的基因治療是將正常基因的cDNA序列或是有治療價值的基因（如CRISPR-Cas9相關的基因編輯工具）通過一定的方式導入人體靶細胞內，達到替代或修復缺陷基因、治療疾病的目的。導入基因插入位置不當、過高或過低表達，都可能會導致副作用。盡管基因編輯可以實現生理水平的基因表達，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發強烈的免疫反應仍然是巨大的挑戰。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來，它的反密碼子通過堿基配對原則可以識別無義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無義突變位點時不啟動翻譯終止而是繼續向后進行翻譯，獲得有功能的全長蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關基因發生無義突變，產生終止密碼子UAG。研究者構建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對該無義突變設計的sup-tRNA表達載體（產生的sup-tRNA能夠識別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡寫作sup-tRNATyr），將其導入細胞進行研究，發現與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進一步利用重組腺相關病毒作為載體將sup-tRNA導入患病小鼠模型中，實驗顯示能夠降低黏多糖過度積存，實現對該病癥的有效治療，其療效可以持續半年以上。
從整體來看，G418在促進跨越無義突變位點繼續翻譯時引入的氨基酸較為隨機，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會影響內源tRNA穩態，所以sup-tRNA在個體治療中具有很高的安全性，因而在未來基因突變引起的疾病相關治療中具有非常大的應用前景。
（1）侵染時，作為載體的重組腺相關病毒與靶細胞膜上的發生識別，引發內吞，進入細胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細胞的催化合成其互補DNA鏈，再經過過程產生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內源tRNA穩態，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過檢測來確定是否跨越無義突變位點繼續向后翻譯。實驗結果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進無義突變位點的翻譯方面更加有效，支持這一結論的依據是：。
（4）有文獻報道，已在近1000個不同的人類基因中發現了7500多個無義突變。常規的基因治療需要為每種疾病設計獨特的治療策略，這將是一項耗費驚人的項目。據此說明sup-tRNA的應用價值。發布：2025/1/3 8:0:1組卷：28引用：1難度：0.6 -
2．人類基因組計劃測定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ）
發布：2024/12/31 0:30:1組卷：115引用：7難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，自然界有些植物能產生幾丁質酶催化幾丁質水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入沒有抗性的植物體內，可增強其抗真菌的能力。如圖表示為獲取幾丁質酶基因而建立cDNA文庫的過程。
（1）圖示以mRNA為材料通過法獲得cDNA，該方法依據的原理是，通過這種方法獲得的基因中因缺乏和結構，導致將其直接導入受體細胞中不能復制和表達。
（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更容易提取到mRNA，原因是，且提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（3）將從cDNA文庫中獲得的幾丁質酶基因和質粒載體用酶和DNA連接處理后連接起來，構建基因表達載體，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：5引用：1難度：0.7