Cre/loxP重組酶系統是對轉基因受體細胞DNA上的特定序列進行定點切割和重新連接，從而在基因或染色體水平上對生物基因進行遺傳改造的一種技術。其原理是重組酶Cre能識別loxP位點（特定的DNA序列），并使loxP位點間的基因序列被重組或刪除。受此啟發，科學家在檢測抗蟲基因成功導入煙草細胞后，嘗試用Cre/loxP重組酶系統刪除轉基因煙草細胞內的抗除草劑基因，其技術過程如圖2（其中■表示啟動子）。
（1）通過基因改造獲得抗蟲煙草過程中，為大量獲得抗蟲基因，可選擇圖1中引物II、IIIII、III（用圖中羅馬數字表示）組合進行PCR擴增；擴增時，為確保抗蟲基因和表達載體充分連接，常在基因上、下游引物的5'5'端添加不同的限制酶切位點，其目的是減少DNA自連，使抗蟲基因能定向插入表達載體減少DNA自連，使抗蟲基因能定向插入表達載體。
（2）loxP是一種含34個堿基對的小型DNA片段，由一個不對稱的間隔區和兩個反向重復序列組成。Cre酶能特異性地識別反向重復序列并于特定位置切開磷酸二酯鍵，類似于基因工程中的限制限制酶，從遺傳學角度分析，Cre酶改變質粒的原理是基因重組基因重組。
（3）通常用農桿菌轉化農桿菌轉化法把攜帶抗蟲基因的重組質粒甲導入煙草細胞，經檢測導入成功后，抗除草劑基因即失去用途，繼續留在煙草體內可能會引發的生物環境安全問題是抗除草劑基因可能轉移到雜草中，造成基因污染抗除草劑基因可能轉移到雜草中，造成基因污染。
（4）經Cre酶處理后，質粒中的兩個loxP序列分別被切開，得到圖2右側的兩個環狀DNA分子。由于質粒乙的抗除草劑基因前沒有啟動子質粒乙的抗除草劑基因前沒有啟動子，抗除草劑基因不再表達，之后會在培養過程中消失。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】II、III；5'；減少DNA自連，使抗蟲基因能定向插入表達載體；限制；基因重組；農桿菌轉化；抗除草劑基因可能轉移到雜草中，造成基因污染；質粒乙的抗除草劑基因前沒有啟動子
【解答】
【點評】
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