大多數(shù)奶酪的生產(chǎn)需要使用凝乳酶來(lái)凝聚固化奶中的蛋白質(zhì)，科學(xué)家將編碼牛凝乳酶的基因（長(zhǎng)度1.5kb）導(dǎo)入大腸桿菌獲得工程菌，再通過(guò)工業(yè)發(fā)酵批量生產(chǎn)凝乳酶，如圖1為所用載體示意圖，下表為限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。請(qǐng)根據(jù)圖表回答問(wèn)題：
| 限制酶 | HindⅢ | Pvit2 | KpnⅠ | EcoRⅠ | PstⅠ | BamHⅠ |
| 識(shí)別序列 | A↓AGCTT | CAG↓CTG | G↓GTACC | G↓AATTC | CTGC↓AG | G↓GATCC |
變性
變性
、復(fù)性
復(fù)性
和 延伸
延伸
三步。（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體：為使目的基因與載體正確連接，在擴(kuò)增目的基因時(shí)，應(yīng)在其一對(duì)引物的5’端分別引入
Pvit2和EcoRⅠ
Pvit2和EcoRⅠ
兩種不同限制酶的識(shí)別序列。在目的基因和載體連接時(shí)，可選用 T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：先用
CaCl2（Ca2+）
CaCl2（Ca2+）
處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于 感受態(tài)
感受態(tài)
的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。（4）篩選與鑒定：將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編號(hào)為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用題（2）中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖2，2
2
號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】變性；復(fù)性；延伸；Pvit2和EcoRⅠ；T4DNA連接酶；CaCl2（Ca2+）；感受態(tài)；氨芐青霉素；2
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/28 8:0:9組卷：3引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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