新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通過與人體黏膜細胞表面的ACE2受體結合而進入細胞，是宿主抗體的重要作用位點。下圖1是科研人員利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受體結合域RBD基因作為抗原基因序列，研制新冠病毒雙抗原疫苗的技術路線。已知PCR1與PCR2要分別進行，然后將產物混合，使用引物1和引物4進行PCR3，最終獲得大量S-RBD融合基因（1300bp）。
（1）PCR3過程中，片段1與片段2連接形成S-RBD融合基因，需要使用 耐高溫DNA聚合耐高溫DNA聚合酶，該酶的作用是 將單個的脫氧核苷酸連接到引物的3'端將單個的脫氧核苷酸連接到引物的3'端。
（2）為使S-RBD融合基因在工程菌中表達時，先合成S蛋白，在重組pX質粒中，引物4對應的區段要連接在靠近 啟動子啟動子（填“啟動子“或“終止子”）的部位，原因是 原核細胞中基因表達時可以邊轉錄邊翻譯，引物4對應的區段靠近啟動子時先轉錄出S蛋白的mRNA序列原核細胞中基因表達時可以邊轉錄邊翻譯，引物4對應的區段靠近啟動子時先轉錄出S蛋白的mRNA序列。
（3）為初步檢測過程B構建是否成功，對重組pX系列質粒及其酶切產物進行凝膠電泳檢測，結果如圖2。據圖可知，酶切時用到的酶是 HindⅢ、Ndel、EcoRIHindⅢ、Ndel、EcoRI，重組質粒pX2和pX5構建成功的依據是 重組質粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對總和為S—RBD融合基因長度1300重組質粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對總和為S—RBD融合基因長度1300。
（4）在工程菌的篩選時，可先后用兩種抗生素進行影印培養實驗（將首次培養的菌落用滅菌絨布沾取印到新培養基上培養），在第二次培養時存活的菌落是否含有目的基因 否否（填“是”或“否”）。鑒定pX質粒是否導入工程菌還可以采用的方法是 觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質粒觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質粒。
（5）試從免疫學角度分析此種雙抗原疫苗比常規S蛋白疫苗更具優勢的原因 此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結合域RBD，有利于進入靶細胞，從而激發細胞免疫此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結合域RBD，有利于進入靶細胞，從而激發細胞免疫。
【答案】耐高溫DNA聚合；將單個的脫氧核苷酸連接到引物的3'端；啟動子；原核細胞中基因表達時可以邊轉錄邊翻譯，引物4對應的區段靠近啟動子時先轉錄出S蛋白的mRNA序列；HindⅢ、Ndel、EcoRI；重組質粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對總和為S—RBD融合基因長度1300；否；觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質粒；此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結合域RBD，有利于進入靶細胞，從而激發細胞免疫
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：20引用：2難度：0.5
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6